葡萄糖氧化酶（GOD）測試盒 微量法

葡萄糖氧化酶（GOD）測試盒
微量法
貨號：BC0695
規格：100T/96S

產品內容：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 3mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：液體 1mL×1 支，-20℃保存，融化后可分裝保存。

產品說明：
    GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動物和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產生 H 2 O 2 ，是生物體中產生活性氧的代謝途徑之一。
    GOD 催化葡萄糖產生 H 2 O 2 ，過氧化物酶在有氧存在時催化 H 2 O 2 分解產生的氧又將鄰聯茴香胺氧化生成有色物質，顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關系。

需自備設備跟儀器
    可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

操作步驟
一、 樣品測定的準備
1、組織處理：稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）：直接檢測。
二、 測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長 500nm，蒸餾水調零。
2、GOD 工作液的配制：取 15mL 試劑一加 3mL 試劑二混勻，調 PH  5.1（現配現用）。
3、加樣表：
試劑名稱（μL）  測定管
GOD 工作液  174
試劑三  6
混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 5min
樣本  20
樣品測定前將 GOD 工作液與試劑三放入 37℃水浴中保溫，然后將上述試劑按順序加入微量比
色皿/96 孔板中，加樣本的同時開始計時；在 500 nm 波長下記錄 20 秒時的初始吸光度 A1 及 1 分20 秒時的吸光度 A2。計算 ΔA=A2-A1。
三、GOD  活力單位的計算
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、動物組織 GOD 活力的計算
（1）按蛋白濃度計算
單位的定義 ：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD（U/mg prot）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T=1333×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD（U/g 鮮重）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣)÷T=1333×ΔA÷W
2、血清（漿）GOD 活力的計算
單位的定義 ：每 mL 血清（漿）在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD（U/mL）=ΔA÷d÷ε×V 反總÷T÷V 樣本=1333×ΔA
V 反總：反應總體積，0.2mL；V 樣本：加入樣本體積，0.02mL；V 提取，加入提取液體積，
1mL；cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；d：光徑，1cm；ε：氧化型鄰聯茴香胺消光系數，7.5×10 -3 mL/μmol/cm；T：反應時間，1min。
b.用 用 96  孔板測定的計算公式如下
1、動物組織 GOD 活力的計算
（1）按蛋白濃度計算
單位的定義 ：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD（U/mg prot）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T=2222×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD（U/g 鮮重）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣)÷T=2222×ΔA÷W
2、血清（漿）GOD 活力的計算
單位的定義 ：每 mL 血清（漿）在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD（U/mL）=ΔA÷d÷ε×V 反總÷T÷V 樣本=2222×ΔA
V 反總：反應總體積，0.2mL；V 樣本：加入樣本體積，0.02mL；cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；
W：樣本鮮重，g；d：光徑，0.6cm；ε：氧化型鄰聯茴香胺消光系數，7.5×10 -3 mL/μmol/cm；T：反應時間，1min。
1、不同勻漿組織中 GOD 活力不一樣，做正式試驗之前請做 1-2 只預試，若 A2-A1>1,
則說明組織活力太高，必須用提取液稀釋成適當濃度勻漿上清液，使 A2-A1<1，
以提高檢測靈敏度。
實驗過程中若出現 A1> A2 現象請將樣本用提取液稀釋成適當濃度.
2、好兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。
3、此試劑盒僅適用于動物組織和動物血清（漿）。

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