土壤酸性轉化酶（S-AI）活性檢測試劑盒

土壤酸性轉化酶（S-AI）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC3070
規格：50T/24S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前取1瓶加入15 mL試劑一充分溶解備用，用不完的試劑2-8℃保存2周；

2. 標準品：10 mg無水葡*糖。臨用前加入1 mL試劑一充分溶解，制備10 mg/mL葡萄糖標準溶液待用，2-8℃保存兩周。

產品說明：
S-AI在pH為4.5~5.0（酸性）條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代謝關鍵酶之一。S-AI催化蔗糖降解產生還原糖，進一步與 3,5-二硝基水楊酸反應，生成棕紅色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范圍內540nm光吸收增加速率與S- AI活性成正比。




注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、恒溫培養箱/水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水、30-50目篩、甲苯（不允許快遞）。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30~50目篩。
二、測定步驟

1. 分光光度計預熱30min以上，調節波長至540nm，蒸餾水調零。

2. 標準液的稀釋：將10mg/mL葡萄糖標準液用試劑一稀釋至0.2、0.15、0.1、0.08、0.06mg/mL的葡萄糖標準液備用。

3. 標準液稀釋表

備注：試驗中每個標準管需標準品800µL。

1. 樣本測定：

混勻，煮沸10min左右（蓋緊，以防止水分流失），流水冷卻后，540nm處蒸餾水調零，記錄各管吸光值A，記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管需設一個對照管。標準曲線和空白管只需測1-2次。
三、S-AI活性計算

1. 標準曲線的繪制：

根據葡萄糖標準管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據標準曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，mg/mL）。

1. S-AI活性計算

單位定義：37℃每g土壤每天產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。
S-AI（U/g 土樣）=x×V÷W÷T=19.2×x÷W
V：加入的標準液體積，0.8mL；W：樣本質量，g；T：反應時間：1/24d。
注意事項：
1、如果加入試劑三，煮沸10min后有混濁物出現，建議離心除去沉淀（10000rpm，2min），取上清測定吸光度；
2、如果吸光值大于1，可以將上清液再進行稀釋；若吸光值較小，可以減少上清液稀釋倍數。兩種操作均要注意改變公式中的稀釋倍數。
實驗實例：

1. 取兩管0.1g林土，即為測定管和對照管，按照測定步驟操作，記為A測定管、A對照管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.425-0.054=0.371，標準曲線：y=6.0331x-0.3103，x=0.113，計算酶活得：S-AI（U/g 土樣）=19.2×x÷W=19.2×0.113÷0.1=21.696 U/g 土樣。

2. 取兩管0.1g林土，即為測定管和對照管，按照測定步驟操作，記為A測定管、A對照管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.410-0.055=0.355，標準曲線：y=6.0331x-0.3103，x=0.110，計算酶活得：

S-AI（U/g 土樣）=19.2×x÷W=19.2×0.110÷0.1=21.12 U/g 土樣。
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