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儲存條件
2-8℃
中文名稱
土壤纖維素酶(S-CL)活性檢測試劑盒
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
Soil Cellulase(S-CL) Activity Assay Kit
檢測方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
規格
100T/48S
自備試劑
該試劑盒實驗過程中需自備試劑，詳情見網站說明書

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產品概述

品牌	SOLARBIO/索萊寶	CAS	詳詢
分子式	詳詢	純度	詳詢
分子量	詳詢	貨號	BC0155
規格	100T/48S	供貨周期	現貨
主要用途	土壤纖維素酶（S-CL）檢測	應用領域	環保,化工,生物產業,農林牧漁,綜合

土壤纖維素酶（S-CL）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC0155
規格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規格	保存條件
試劑一	液體2.5 mL×1瓶（自備）	2-8℃保存
試劑二	液體5 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三	液體20 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑四	液體6 mL×1瓶	2-8℃保存
標準品	粉劑×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

產品說明：
S-CL主要來源于土壤微生物，S-CL催化農作物秸稈產生的葡萄糖是主要的碳源營養物質。本產品采用3,5－二硝基水楊酸法測定S-CL催化纖維素降解產生的還原糖的含量。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、30~50目篩、研缽、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30~50目篩。
二、測定步驟

分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至540nm，分光光度計用蒸餾水調零。
標準品準備：將標準品用蒸餾水稀釋至1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mg/mL。
標準品稀釋表：

序號	稀釋前濃度（mg/mL）	標準液體積（µL）	蒸餾水體積（µL）	稀釋后濃度（mg/mL）
1	10	100	900	1

2	1	160	40	0.8
3	1	120	80	0.6
4	1	80	120	0.4
5	1	40	160	0.2
6	1	20	180	0.1

試驗中每個標準管需15µL標準溶液。
4、操作表（在EP管中依次加入下列試劑）

	對照管	測定管	標準管	空白管
風干土樣（g）	0.05	0.05	-	-
試劑一（μL）	25	25	-	-
	煮沸15min（蓋緊）	振蕩混勻，室溫放置15min	-	-
試劑二（μL）	45	45	-	-
試劑三（μL）	185	185	-	-
蒸餾水（μL）	45	45	-	-
振蕩混勻，40℃水浴糖化1h 后，煮沸15min（蓋緊，防止水分散失），10000rpm常溫離心10min，取上清得糖化液。			-	-
糖化液（μL）	15	15	-	-
標準液（μL）	-	-	15	-
蒸餾水（μL）	-	-	-	15
試劑四（μL）	35	35	35	35
混勻，沸水浴中煮沸顯色15min（蓋緊，防止水分散失），冷卻
蒸餾水（μL）	250	250	250	250
混勻，冷卻后，取200μL至微量玻璃比色皿或96孔板中，測定540nm下吸光值A，分別記為A對照管、A測定管、A標準管、A空白管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管設定一個對照管。空白管和標準曲線只需做1-2次。

三、S-CL酶活計算
1、標準曲線的建立：
以標準溶液濃度（y）為縱坐標，吸光度ΔA標準（x）為橫坐標建立標準曲線y=kx+b。根據標準曲線，將ΔA測定帶入公式中（x）計算樣本濃度y（mg/mL）。
2、S-CL酶活計算：
單位的定義：每天每g土樣中產生1mg葡萄糖定義為一個酶活力單位。
S-CL酶活（U/g 土樣）=y×V反總÷W÷T =144×y
T：反應時間，1h=1/24d；V反總：反應體系總體積，0.3mL；W：樣本質量，0.05g。
注意事項：
若樣本測定管吸光度過小（0.02），可延長反應時間，即40℃水浴糖化時間，最后計算時加以換算即可。
參考文獻：

Deng S P, Tabatabai M A. Cellulase activity of soils[J]. Soil Biology and Biochemistry, 1994, 26(10): 1347-1354.
Sinegani A A S, Sinegani M S. The effects of carbonates removal on adsorption, immobilization and activity of cellulase in a calcareous soil[J]. Geoderma, 2012, 173: 145-151.

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土壤纖維素酶(S-CL)活性檢測試劑盒

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