土壤淀*酶檢測試劑盒

土壤淀*酶（S-AL）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1920
規格：50T/24S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入5 mL蒸餾水，置于常溫水中并加熱至煮沸，期間不斷攪拌或震蕩至粉劑溶解，用不完的試劑2-8℃保存4周。

2. 標準品：10 mg麥芽糖。臨用前加入1.38 mL蒸餾水配制成20 μmol/mL的儲備液，2-8℃保存兩周。

產品說明：
淀*酶（EC3.2.1.1）是催化淀粉水解的一類酶的總稱。土壤中的淀*酶主要來自于微生物，是一種重要的酶制劑，廣泛應用于糧食加工、食品、釀造、發酵、紡織品工業和醫藥行業
淀*酶水解淀粉產生還原糖，可與3,5-二硝基水楊酸反應生成紅棕色物質，在540nm處有特征吸收峰，顏色深淺在一定范圍內與還原糖量成正比。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
天平、恒溫培養箱/水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、30~50目篩、研缽、甲苯（不允許快遞）。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：

1. 當ΔA大于1時，建議將上清液稀釋后再進行測定，注意在計算公式中乘以稀釋倍數。

2. 若ΔA測定較小，增加反應的上清液體積或適當增加酶促反應時間，計算酶活時對公式進行修改。

3. 建議每次實驗煮沸后的冷卻時間保持一致，吸光值請于30min內測定完成。

實驗實例：

1. 取0.1g三葉草土于1.5mLEP管中，依次加入20μL甲苯、200μL試劑一、200μL試劑二為測定管；取0.1g三葉草土于1.5mLEP管中，依次加入20μL甲苯、200μL試劑一、200μL蒸餾水為對照管，均放于37℃培養24h，后離心取上清再液稀釋5倍，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.624-0.109=0.515，標準曲線：y=1.289x-0.2826，x=0.6188，按土樣重量計算酶活：

S-AL（U/g 土樣）=0.42×x÷W×5（稀釋倍數）=0.42×0.6188÷0.1×5（稀釋倍數）=12.995 U/g 土樣。
參考文獻：
[1] Kathiresan K, Manivannan S. α-Amylase production by Penicillium fellutanum isolated from mangrove rhizosphere soil[J]. African journal of Biotechnology, 2006, 5(10).
[2] Ebregt A, Boldewijn J. Influence of heavy metals in spruce forest soil on amylase activity, CO 2 evolution from starch and soil respiration[J]. Plant and Soil, 1977, 47(1): 137-148.
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