土壤過氧化物酶(S-POD)活性檢測試劑盒

土壤過氧化物酶（S-POD）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC0895
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

試劑一：臨用前加入5.5 mL蒸餾水，用不完的試劑2-8℃保存一周；

試劑四：自備*；

標(biāo)準(zhǔn)品：相當(dāng)于每1mL*相中含有0.2mg/mL紫色沒食子素。

產(chǎn)品說明：

POD主要來源于土壤微生物，能夠氧化土壤有機(jī)物質(zhì)產(chǎn)生過氧化物，在腐殖質(zhì)的形成過程中具有重要作用。S-POD催化有機(jī)物質(zhì)氧化成醌，后者在430nm有特征光吸收。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、0.5mol/L HCl溶液、微量玻璃比色皿/96孔板（非聚苯乙烯材質(zhì)）、30-50目篩、*（不允許快遞）、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30-50目篩。
二、測定步驟

標(biāo)準(zhǔn)品處理：將標(biāo)準(zhǔn)品用0.5 mol/L HCl溶液稀釋至0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0.01、0mg/mL，可參考下表。

備注：試驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需200µL標(biāo)準(zhǔn)溶液

標(biāo)曲測定：分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至430nm，0mg/mL管調(diào)零，直接測定稀釋后各標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)。

3、樣本測定：

三、S-POD活力計(jì)算
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（y，mg/mL）和吸光度A標(biāo)準(zhǔn)（x，A標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測定（x）帶入公式計(jì)算測定中樣本的濃度y值（mg/mL）。
2、S-POD活力計(jì)算
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg紫色沒食子素定義為一個(gè)酶活力單位。
S-POD活力（U/g 土樣）=y×V提取相÷W÷T=516×y
T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d；V提取相：提取相總體積，0.43mL；W：樣本質(zhì)量，0.02g。
參考文獻(xiàn)：

Doxey D L. The use of pyrogallol to demonstrate peroxidase in mammalian blood eosinophils[J]. Stain Technology, 1962, 37(6): 367-371.

Nozaki O, Ji X, Kricka L J. New enhancers for the chemiluminescent peroxidase catalysed chemiluminescent oxidation of pyrogallol and purpurogallin[J]. Journal of bioluminescence and chemiluminescence, 1995, 10(3): 151-156.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0110/BC0115  土壤多酚氧化酶（S-PPO）活性檢測試劑盒
BC0100/BC0105  土壤過氧化氫酶（S-CAT）活性檢測試劑盒

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