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品牌	SOLARBIO/索萊寶	CAS	詳詢
分子式	詳詢	純度	詳詢
分子量	詳詢	貨號	BC2450
規格	50管/48樣	供貨周期	現貨
主要用途	植物組織果糖含量測定	應用領域	環保,化工,生物產業,農林牧漁,綜合

酰基轉移酶（AAT）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2350
規格：10T/9S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規格	保存條件
提取液	液體15 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體10 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×1支	-20℃保存
試劑三	液體1.5 mL×1支	2-8℃保存
試劑四	液體1mL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

提取液：內含不溶物，使用前搖勻；
試劑二：臨用前加蒸餾水1mL充分溶解，未用完的試劑2-8℃可以保存2周；

產品說明：
AAT是一個多功能蛋白大家族，主要負責催化生物體內各種?；腿ヵ；磻诨虮磉_、代謝和信號傳導中具有重要作用。

AAT催化乙酰CoA轉移乙?；蕉〈?，同時還原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，測定412nm吸光度增加速率，來計算AAT活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、組織樣本：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。4℃，15000 g離心20min，取上清液待測。
2、血清（漿）樣本：直接檢測。（若液體有渾濁則離心后進行測定）
二、測定步驟

分光光度計預熱30min 以上，調節波長至412nm，蒸餾水調零。
試劑一在37℃水浴保溫20min以上。
樣本測定：

試劑名稱（μL）	空白管	測定管
蒸餾水	100	-
上清液	-	100
試劑一（預熱）	700	700
試劑二	50	50
試劑三	100	100
試劑四	50	50

將上述試劑按順序加入1mL 玻璃比色皿中，加試劑四的同時開始計時，充分吹打混勻，在412nm波長下記錄第10s時的初始吸光度A1和130s后的吸光值A2，計算ΔA空=A2空-A1空、ΔA測=A2測-A1測、ΔA=ΔA測-ΔA空。空白只需做1-2次。
三、AAT活性計算
1、按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：37℃中每mL反應體系下每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化0.001個單位為1個酶活單位。
AAT (U/mg prot) =ΔA÷0.001÷(Cpr×V樣) ÷T= 5000×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質濃度。
2、按樣本質量計算
單位的定義：37℃中每mL反應體系下每克組織每分鐘催化吸光值變化0.001個單位為1個酶活單位。
AAT (U/g 質量) =ΔA÷0.001÷(V樣÷V樣總×W) ÷T=5000×ΔA÷W
3、按血清體積計算
單位的定義：37℃中每mL反應體系下每mL血清每分鐘催化吸光值變化0.001個單位為1個酶活單位。
AAT (U/mL 血清) =ΔA÷0.001÷V樣÷T=5000×ΔA
Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，需要另外測定；V樣：加入反應體系中上清液體積，0.1mL；W：樣本質量，g；V樣總：提取液體積，1mL；T：反應時間，2min。
注意事項：

當吸光值大于1時，建議稀釋后測量。
如果ΔA測小于0.01，可以延長反應時間，如測定10s和310s的吸光度，計算時相應修改計算公式中反應時間。

實驗實例：

取0.1g腎臟加入1mL提取液進行樣本處理，取上清后稀釋4倍后按測定步驟操作，測得ΔA空=A2空-A1空=0.105-0.101=0.004、ΔA測=A2測-A1測=0.665-0.479=0.186、ΔA=ΔA測-ΔA空=0.186-0.004=0.182，按樣本質量計算酶活得：AAT (U/g 質量) =5000×ΔA÷W×4（稀釋倍數）=36400 U/g 質量。
取兔血清直接按照測定步驟操作，測得ΔA空=A2空-A1空=0.105-0.101=0.004、ΔA測=A2測-A1測0.622-0.521=0.101、ΔA=ΔA測-ΔA空=0.101-0.004=0.097，按血清體積計算酶活得：AAT (U/mL 血清) =5000×ΔA=5000×0.097=485 U/mL 血清。

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