異檸檬酸含量檢測試劑盒 三羧酸

異檸檬酸含量檢測試劑盒說明書

紫外分光光度法

貨號：BC5950

規格：50T/48S

產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑二工作液：臨用前先離心，根據樣本量按試劑二：蒸餾水=10μL：90μL（共100μL，約1T）的比例配制后使用，現配現用。

2、 試劑三：臨用前加入4 mL蒸餾水充分溶解，未用完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復凍融。

3、 標準品：臨用前加入1 mL蒸餾水充分溶解成20μmol/mL異檸檬酸標準品。

4、 工作液：臨用前根據樣本量按試劑一：試劑二工作液：試劑三=750μL：100μL：50μL（共900μL，約1T）配成工作液后使用，現配現用。

產品說明：

異檸檬酸（Isocitric Acid）是檸檬酸的異構體，在許多水果和蔬菜以及由這些原料制成的食品中發現了大量的異檸檬酸鹽。生物能夠利用的是D型異檸檬酸，是三羧酸循環中的一個成分。異檸檬酸在異檸檬酸脫氫酶（ICDH，EC1.1.1.41）的作用下變成a-酮戊二酸，同時NAD（P）還原為NAD（P）H，據此可以計算異檸檬酸含量。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計、1mL石英比色皿、天平、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體的操作步驟請見“產品資料"文件

注意事項：

1.最好兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。

2.若樣本ΔA<0.005，可適當增大樣本量后測定；若樣本ΔA>1.2或A測定>1.5，可用蒸餾水稀釋上清液后測定，

注意同步修改計算公式中的稀釋倍數。

3.提取液一中含有蛋白質沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測定，如需測定蛋白濃度，需另取組織。

實驗實例：

1、 取0.1139g蘋果加入提取液進行冰浴勻漿，取上清后按照測定步驟操作，用1mL石英比色皿測得ΔA測定=（A2測定-A1測定）-（A2空白-A1空白）=（0.241-0.125）-（0.066-0.059）=0.109，帶入標曲y=0.1414x-0.0466，R²=0.9991，計算x=1.100，按樣本質量計算異檸檬酸含量得：

異檸檬酸含量（μmol/g 質量）=1.1875×x÷W×F=11.468 μmol/g 質量。

2、 取0.1033g橙子葉加入提取液進行冰浴勻漿，取上清用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作，用1mL石英比色皿測得ΔA測定=（A2測定-A1測定）-（A2空白-A1空白）=（1.001-0.923）-（0.066-0.059）=0.071，帶入標曲y=0.1414x-0.0466，R²=0.9991，計算x=0.832，按樣本質量計算異檸檬酸含量得：

異檸檬酸含量（μmol/g 質量）=1.1875×x÷W×F=19.129 μmol/g 質量。

3、 取500μL橙汁飲料取上清后按照測定步驟操作，用1mL石英比色皿測得ΔA測定=（A2測定-A1測定）-（A2空白-A1空白）=（0.856-0.840）-（0.066-0.059）=0.009，帶入標曲y==0.1414x-0.0466，R²=0.9991，計算x=0.393，按液體體積量計算異檸檬酸含量得：

異檸檬酸含量（μmol/mL）=x×F=0.393 μmol/mL。

參考文獻：

[1] Kvasni Ka, Franti Ek, et al. "Determination of Isocitric Acid in Citrus Juice—A Comparison of HPLC, Enzyme Set and Capillary Isotachophoresis Methods." Journal of Food Composition & Analysis 15.6(2002):685-691.

[2] Kong, Min Jung, et al. "Mitochondrial NADP⁺-dependent isocitrate dehydrogenase deficiency increases cisplatin-induced oxidative damage in the kidney tubule cells." Cell Death & Disease 9.5(2018):488.

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