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          • 酮體含量檢測試劑盒 輔酶
          產(chǎn)品名稱:

          酮體含量檢測試劑盒 輔酶

          產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
          廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-07-08
          酮體含量檢測試劑盒 輔酶
          有效期
          6個月
          儲存條件
          -20℃
          單位

          英文名稱
          Ketone Body Content Assay Kit
          檢測方法
          紫外分光光度法 Spectrophotometer
          規(guī)格
          50T/48S

          產(chǎn)品概述

          品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
          分子式詳詢純度詳詢
          分子量詳詢貨號BC5060
          規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
          主要用途酮體含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

          酮體含量檢測試劑盒(血清、血漿、尿液等)說明書

          紫外分光光度法

          貨號:BC5060

          規(guī)格:50T/48S

          產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

          試劑名稱

          規(guī)格

          保存條件

          試劑一A

          液體55mL×1

          2-8℃保存

          試劑一B

          液體55mL×1

          2-8℃保存

          試劑二A

          粉劑×2

          -20℃保存

          試劑二B

          粉劑×2

          -20℃保存

          試劑三

          粉劑×3

          -20℃保存

          標(biāo)準(zhǔn)品1

          粉劑×1

          2-8℃保存

          標(biāo)準(zhǔn)品2

          粉劑×1

          -20℃保存

          溶液的配制:

          1、 試劑二A液:臨用前取一支加入1.2mL蒸餾水,充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃可保存3周。避免反復(fù)凍融;

          2、 試劑二B液:臨用前取一支加入600μL蒸餾水,充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃可保存3周。避免反復(fù)凍融;

          3、 試劑三:臨用前取一支加入400μL蒸餾水,充分溶解。用不完的試劑分裝后-20℃保存,可以保存3周。避免反復(fù)凍融;

          4、 標(biāo)準(zhǔn)品18mg 3-羥基丁酸鈉。臨用前加入0.98mL蒸餾水,充分溶解,即8mg/mL 3-羥基丁酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,2-8℃可以保存4周。臨用前根據(jù)試驗(yàn)所需量用蒸餾水稀釋成0.2mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待用,即為標(biāo)準(zhǔn)溶液1;

          5、 標(biāo)準(zhǔn)品28mg乙酰乙酸鋰。臨用前加入0.95mL蒸餾水,充分溶解,即8mg/mL乙酰乙酸鋰標(biāo)準(zhǔn)溶液,-20℃可以保存4周。臨用前根據(jù)試驗(yàn)所需量用蒸餾水稀釋成0.05mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待用,即標(biāo)準(zhǔn)溶液2;

          6、 BOH工作液配制:臨用前根據(jù)試驗(yàn)所需量將試劑一A液、試劑二A液 、試劑三按照850μL:40μL:10μL(共900μL,1T的量)的比例配成工作液,充分混勻,置于37℃保溫15min此步驟不可省略),現(xiàn)用現(xiàn)配,工作液在4h內(nèi)用完;

          7、 AcAc工作液配制:臨用前根據(jù)試驗(yàn)所需量將試劑一B液、試劑二B液、試劑三按照870μL:20μL:10μL(共900μL1T的量)的比例配成工作液,充分混勻,置于37℃保溫15min此步驟不可省略),現(xiàn)用現(xiàn)配,工作液在4h內(nèi)用完。

          產(chǎn)品說明:

          酮體是肝臟脂肪酸氧化分解的中間產(chǎn)物乙酰乙酸(AcAc)、β-羥丁酸(BOH)及丙 酮三者統(tǒng)稱。酮體中丙 酮的生成量相當(dāng)小,生成后即被吸收。乙酰乙酸和β-羥丁酸則經(jīng)血流進(jìn)入肝外組織,在此被氧化,經(jīng)檸檬酸循環(huán)提供更多能量給那些組織使用,例如骨、心肌和腎皮質(zhì)。

           

          pH 7.037℃條件下,BOHβ-羥丁酸脫氫酶(HBDH)催化下脫氫生成乙酞乙酸,同時NAD+被還原成NADH;在pH 8.837℃條件下,AcAcHBDH還原為3-羥基丁酸酯或脫羧生成丙 酮,同時NADH被氧化成NAD+,NADH340nm波長下有特征吸收峰,通過檢測在340nm波長下的吸光值變化可以計(jì)算出BOHAcAc的含量,從而計(jì)算出樣本中酮體的含量。

          注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

          需自備的儀器和用品:

          紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液器、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

          操作步驟:

          一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

          血清(漿)、尿液等液體樣本:直接測定。(若有渾濁可以離心取上清后測定)

          二、測定步驟

          1、 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,用蒸餾水調(diào)零。

          2、 BOH含量測定:

          試劑名稱(μL

          測定管

          標(biāo)準(zhǔn)管

          空白管

          樣本

          100



          標(biāo)準(zhǔn)溶液1


          100


          蒸餾水



          100

          BOH工作液

          900

          900

          900

          將上述溶液依次加入適1mL石英比色皿中,充分混勻20s,記錄340nm20s時吸光值ABOH樣本1、ABOH標(biāo)準(zhǔn)1、ABOH空白1,37℃水浴鍋或者培養(yǎng)箱反應(yīng)5min,反應(yīng)后拿出迅速擦干測定5min20s時吸光值ABOH樣本2、ABOH標(biāo)準(zhǔn)2、ABOH空白2。計(jì)算ΔABOH樣本=ABOH樣本2-ABOH樣本1,ΔABOH標(biāo)準(zhǔn)=ABOH標(biāo)準(zhǔn)2-ABOH標(biāo)準(zhǔn)1ΔABOH空白=ABOH空白2-ABOH空白1。

             空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次。

           

          3、 AcAc含量測定:

          試劑名稱(μL

          測定管

          標(biāo)準(zhǔn)管

          空白管

          樣本

          100



          標(biāo)準(zhǔn)溶液2


          100


          蒸餾水



          100

          AcAc工作液

          900

          900

          900

          將上述溶液依次加入1mL石英比色皿中,充分混勻20s,記錄340nm20s時吸光值AAcAc樣本1、AAcAc標(biāo)準(zhǔn)1、AAcAc空白1,37℃水浴鍋或者培養(yǎng)箱反應(yīng)5min,反應(yīng)后拿出迅速擦干測定5min20s時吸光值AAcAc樣本2、AAcAc標(biāo)準(zhǔn)2、AAcAc空白2。計(jì)算ΔAAcAc樣本=AAcAc樣本1-AAcAc樣本2,ΔAAcAc標(biāo)準(zhǔn)=AAcAc標(biāo)準(zhǔn)1-AAcAc標(biāo)準(zhǔn)2,ΔAAcAc空白=AAcAc空白1-AAcAc空白2

             空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次。

           

          三、酮體含量計(jì)算

          1、 BOH計(jì)算公式

          BOH含量(μmol/mL=(ΔABOH樣本-ΔABOH空白)÷(ΔABOH標(biāo)準(zhǔn)-ΔABOH空白)×CBOH÷126.09×1000

          =1.586×(ΔABOH樣本-ΔABOH空白)÷(ΔABOH標(biāo)準(zhǔn)-ΔABOH空白)

          2、 AcAc計(jì)算公式

          AcAc含量(μmol/mL=(ΔAAcAc樣本-ΔAAcAc空白)÷(ΔAAcAc標(biāo)準(zhǔn)-ΔAAcAc空白)×CAcAc÷108.02×1000

          =0.463×(ΔAAcAc樣本-ΔAAcAc空白)÷(ΔAAcAc標(biāo)準(zhǔn)-ΔAAcAc空白)

          3、 酮體計(jì)算公式

          酮體含量(μmol/mL= BOH含量+ AcAc含量

          CBOHBOH標(biāo)準(zhǔn)溶液1濃度,0.2mg/mLCAcAcAcAc標(biāo)準(zhǔn)溶液2濃度,0.05mg/mL;126.093-羥基丁酸鈉的分子量,126.09mg/mmol108.02:乙酰乙酸鋰的分子量,108.02mg/mmol;1000:單位換算系數(shù),1mmol= 1000μmol

          注意事項(xiàng):

          1. 如果測定初始吸光值>1.5ΔA0.2,建議將樣本用蒸餾水稀釋后再測定。計(jì)算公式中乘上稀釋倍數(shù);

          2. 如果ΔA接近空白值,建議加大樣本量,同時保證反應(yīng)體系總體積不變,相應(yīng)減少工作液加樣量后測定。例如,若增大樣本量為200μL,則工作液調(diào)整為800μL。標(biāo)準(zhǔn)管與樣本管加樣體系應(yīng)保持一致,計(jì)算公式不變。

          實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

          100μL牛血清按上述步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn),1mL石英比色皿測定后進(jìn)行計(jì)算ΔABOH樣本=ABOH樣本2-ABOH樣本1= 0.095-0.056=0.039,ΔABOH標(biāo)準(zhǔn)=ABOH標(biāo)準(zhǔn)2-ABOH標(biāo)準(zhǔn)1=0.175-0.024=0.151,ΔABOH空白=ABOH空白2-ABOH空白1= 0.008-0.005=0.003,ΔAAcAc樣本=AAcAc樣本1-AAcAc樣本2=0.639-0.634=0.005ΔAAcAc標(biāo)準(zhǔn)=AAcAc標(biāo)準(zhǔn)1-AAcAc標(biāo)準(zhǔn)2= 0.586-0.447=0.139ΔAAcAc空白=AAcAc空白1-AAcAc空白2=0.696-0.695=0.001。計(jì)算
            BOH含量(μmol/mL=1.586×(ΔABOH樣本-ΔABOH空白)÷(ΔABOH標(biāo)準(zhǔn)-ΔABOH空白)=0.369μmol/mL

          AcAc含量(μmol/mL=0.463×(ΔAAcAc樣本-ΔAAcAc空白)÷(ΔAAcAc標(biāo)準(zhǔn)-ΔAAcAc空白)=0.0134μmol/mL

          酮體含量(μmol/mL= BOH含量+ AcAc含量=0.383μmol/mL。

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           酮體含量檢測試劑盒 輔酶 酮體含量檢測試劑盒 輔酶


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