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          • 精*酸(Arg)含量檢測(cè)試劑盒 微量法
          產(chǎn)品名稱:

          精*酸(Arg)含量檢測(cè)試劑盒 微量法

          產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
          廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-23
          單位

          中文名稱
          精*酸(Arg)含量檢測(cè)試劑盒 微量法
          有效期
          6個(gè)月
          儲(chǔ)存條件
          2-8℃
          英文名稱
          Arginine(Arg)Content Assay Kit
          檢測(cè)方法
          微量法
          規(guī)格
          100T/96S
          自備試劑
          該試劑盒實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說(shuō)明書

          產(chǎn)品概述

          品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
          分子式詳詢純度詳詢
          分子量詳詢貨號(hào)BC5635
          規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
          主要用途精*酸(Arg)含量檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

          精*酸(Arg)含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

          微量法

          貨號(hào):BC5635

          規(guī)格:100T/96S

          產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

          試劑名稱

          規(guī)格

          保存條件

          提取液一

          液體110 mL×1

          2-8℃保存

          提取液二

          液體17 mL×1

          2-8℃保存

          試劑一

          粉劑×1

          2-8℃保存

          試劑二

          液體6 mL×1

          2-8℃保存

          試劑三

          液體6 mL×1

          2-8℃保存

          試劑四

          液體6 mL×1

          2-8℃保存

          標(biāo)準(zhǔn)品

          粉劑×1

          2-8℃保存

          溶液的配制:

          1、 試劑一:臨用前加入0.6mL無(wú)水乙醇,充分溶解。-20℃可以保存4周。

          2、 工作液配制:按照試劑一︰試劑二=10μL90μL100μL2T)的比例配制,根據(jù)樣本量現(xiàn)配現(xiàn)用。

          3、 標(biāo)準(zhǔn)品:臨用前加入0.918mL蒸餾水,充分溶解,配制成62.5 μmol/mL 精*酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。臨用前取10μL62.5 μmol/mL 精*酸標(biāo)準(zhǔn)溶液于EP管中,加入790 μL蒸餾水充分溶解,配制成0.78125 μmol/mL的精*酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

          產(chǎn)品說(shuō)明:

          精*酸(Arginine)是人體和動(dòng)物體內(nèi)的半必需氨基酸,在機(jī)體中參與蛋白質(zhì)的合成代謝、以及多胺和NO的合成,起著重要的生理作用。精*酸有降低血壓的作用,在體內(nèi)精*酸能夠分解成為一氧化氮,一氧化氮能松弛血管壁平滑肌,調(diào)節(jié)血管彈性,對(duì)血管內(nèi)膜有修復(fù)作用。精*酸能夠刺激并誘導(dǎo)腎上腺激素分泌,從而降低血糖,減少身體中脂肪酸的生產(chǎn),能使高血糖患者的血糖降至正常水平。

          精*酸在堿性介質(zhì)中與甲萘酚和次氯酸鈉生成紅色生成物,其在525nm處有特征吸收峰,以此計(jì)算精*酸含量。

          注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

          需自備的儀器和用品:

          可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、渦旋混勻儀、分析天平、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、蒸餾水、無(wú)水乙醇和冰。

          操作步驟:

          一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

           

          組織:按照質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿后于4℃12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無(wú)氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測(cè)。

          細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(106個(gè)):提取液一體積(mL)為5~11的比例(建議5百萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);于4℃12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無(wú)氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測(cè)。

          血清(漿)等液體:取100μL液體加入1mL提取液一,4℃ 12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無(wú)氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測(cè)。

          注:提取液二需緩慢加入,加入后會(huì)產(chǎn)生大量氣泡,建議使用2mL EP管進(jìn)行操作。

          二、測(cè)定步驟

          1、 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至525nm,分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。

          2、 1.5mL EP管或96孔板中按下表步驟加樣:

          試劑名稱(μL

          測(cè)定管

          標(biāo)準(zhǔn)管

          空白管

          樣本

          50

          -

          -

          標(biāo)準(zhǔn)品

          -

          50

          -

          蒸餾水

          -

          -

          50

          工作液

          50

          50

          50

          避光、冰浴20min

          試劑三

          50

          50

          50

          震蕩30s

          試劑四

          50

          50

          50

              充分混勻后,冰浴反應(yīng)2min,微量玻璃比色皿/96孔板中測(cè)定在525nm處的吸光度,記作A測(cè)定A標(biāo)準(zhǔn)A空白?A測(cè)定=A測(cè)定-A空白?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。(標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做1-2次)

          三、精*酸(Arg)含量計(jì)算

          (1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

          Arg含量μmol/mg prot=C標(biāo)準(zhǔn)×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×V÷Cpr×V×F=0.781×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr×F

          (2) 按樣本質(zhì)量計(jì)算

          Arg含量μmol/g 質(zhì)量)= C標(biāo)準(zhǔn)×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×V上清+V提取液二÷W×V上清÷V提取液一×F

          = 0.928×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F

          (3) 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

          Arg含量μmol/106 cell= C標(biāo)準(zhǔn)×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×V上清+V提取液二÷V上清÷V提取液一×F
          = 0.928×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷N×F

          (4) 按液體體積計(jì)算

          Arg含量μmol/mL= C標(biāo)準(zhǔn)×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×V上清+V提取液二÷V液體×V上清÷V液體+V提取液一))×F

          = 10.205×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×F

          C標(biāo)準(zhǔn)精*酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,0.78125μmol/mLV:反應(yīng)體系中加入的樣本體積,0.05mLV上清:提取時(shí)上清的體積,0.8mLV提取液二:加入提取液二的體積,0.15mLV提取液一:加入提取液一的體積,1mLV液體液體樣本體積,0.1mLCpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,gN:細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量,以106計(jì);F:樣本稀釋倍數(shù)。.

           

           

           

          注意事項(xiàng):

          1. 如果?A測(cè)定大于1.2,可以用蒸餾水對(duì)樣本進(jìn)行稀釋;如果?A測(cè)定過(guò)小,可以加大樣本量。最終計(jì)算時(shí)同步修改計(jì)算公式。

          2. 提取液一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定。如需測(cè)定蛋白含量,需另取組織。

          實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

          1、 稱取0.1162g小鼠腎臟組織,加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算?A測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.524-0.232=0.292?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.575-0.232=0.343帶入公式計(jì)算:

          Arg含量μmol/g 質(zhì)量)=0.928×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W=6.799 μmol/g 質(zhì)量

          2、 稱取0.1186g花生組織,加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算?A測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.556-0.232=0.324?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.575-0.232=0.343帶入公式計(jì)算:

          Arg含量μmol/g 質(zhì)量)=0.928×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W=7.391 μmol/g 質(zhì)量

          3、 取人血清按按前處理和實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn),用96孔板測(cè)得計(jì)算?A測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.3-0.232=0.068?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.575-0.232=0.343帶入公式計(jì)算:

          Arg含量μmol/mL=10.205×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×F =2.023 μmol/mL

          參考文獻(xiàn):

          [1] Francis P S, Barnett N W, Foitzik R C, et al. Chemiluminescence from the Sakaguchi reaction [J]. Analytical Biochemistry, 2004, 329(2):340-341.

          相關(guān)系列產(chǎn)品:

          BC1500/BC1505 植物硝態(tài)氮含量檢測(cè)試劑盒

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           精*酸(Arg)含量檢測(cè)試劑盒 微量法 精*酸(Arg)含量檢測(cè)試劑盒 微量法

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