土壤漆酶檢測試劑盒 微量法

土壤漆酶
活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1965
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前取1瓶加7.5 mL試劑一溶解，現(xiàn)用現(xiàn)配，并且盡快使用，用不完的試劑2-8℃可保存一周；若試劑變色則不能使用。

2. 試劑三：若有白色物質(zhì)析出，放于37℃中溶解即可。

產(chǎn)品說明：
土壤漆酶（SL）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，具有較強的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測方面有非常廣泛的應用。
漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基，在420nm處的吸光系數(shù)遠大于底物ABTS，測定ABTS自由基的增加速率，可計算得漆酶活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低溫離心機、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、震蕩儀、研缽、30-50目篩。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30~50目篩。 
二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到420nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。

2. 加樣表：

注意事項：

1. 測定之前進行預實驗，若吸光值較高（A>1.5），請減少土樣質(zhì)量再進行測定。若數(shù)值偏小可以延長反應時間或增加土樣質(zhì)量進行測定。計算時注意相對應修改計算公式。

2. 離心后若上清仍然渾濁，可再次離心去除。

實驗實例：

1. 稱取兩份0.03g三葉草土于1.5mLEP管中，分別為測定管及對照管，之后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.421-0.23=0.191，按土樣質(zhì)量計算酶活得：

SL活性（U/g土樣）=1.39×ΔA測定÷W= 1.39×0.191÷0.03=8.84 U/g 土樣。

1. 稱取兩份0.03g林土樣于1.5mLEP管中，分別為測定管及對照管，之后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=1.009-0.463=0.546，按土樣質(zhì)量計算酶活得：

SL活性（U/g土樣）=1.39×ΔA測定÷W= 1.39×0.546÷0.03=25.30 U/g 土樣。
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