蛋白質(zhì)純化試劑GST標(biāo)簽純化樹脂（GST Resin）

蛋白質(zhì)純化試劑GST標(biāo)簽純化樹脂（GST Resin）
貨號(hào) ：P2020
規(guī) 格 ：5ml/10ml
保存 ：4℃保存，有效期少一年

產(chǎn)品簡(jiǎn)介 ：
    pGEX載體表達(dá)的外源蛋白與谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶融合， 因此可以通過谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進(jìn)行純化。
    GSTs 是一類以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作為底物，通過形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于 GST 對(duì)底物的親和力是亞毫摩爾級(jí)的，因此谷胱甘肽固化于瓊脂糖形成的親和層析樹脂對(duì) GST 及其融合蛋白的純化效率很高。可以用含游離谷胱甘肽的緩沖液洗脫結(jié)合 GST 融合蛋白。樹脂用 3mol/L NaCl 的緩沖液再生。
    谷胱甘肽瓊脂糖對(duì) GST 融合蛋白的結(jié)合能力很強(qiáng)（每毫升柱床體積的樹脂能結(jié)合 8 毫克融合蛋白） 。
 

特性:
粒度：45-165um 流速：75cm/h
工作 PH:4-10 耐壓:0.3Mpa
載量:＞5mg 谷胱甘肽 S-轉(zhuǎn)移酶

使用說明 ：
谷胱甘肽樹脂的處理:
    1.輕輕顛倒盛有谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂的容器，將樹脂混成勻漿。
    2.取部分勻漿放入 15ml 聚丙烯管（每 100ml 細(xì)菌培養(yǎng)物大約需要 2ml 勻漿） 。
    3.4℃ 500 g 離心 5 分鐘，小心去掉上清。
    4.在樹脂中加入 10 倍柱床體積預(yù)冷的 PBS，顛倒數(shù)次混勻，4℃ 500 g 離心 5 分鐘，小心去掉上清。
    5.每毫升樹脂加入 1 毫升冷的 PBS，制成 50%勻漿，顛倒數(shù)次，混合均勻，懸液冰上放置待用。

制備細(xì)胞抽提物 ：
    6.每 100 毫升培養(yǎng)物的細(xì)胞沉淀重懸于 4mlPBS 緩沖液中。
    7.加入溶菌酶終濃度為 1mg/ml,冰上放置 30 分鐘。
    8.用針筒將 10ml 濃度為 0.2%的 TritonX-100 強(qiáng)行注入黏稠的細(xì)胞裂解物中，劇烈振動(dòng)數(shù)次混勻。加入DNase 和 RNase 終濃度 5ug/ml, 4℃振動(dòng)溫育 10 分鐘，4℃ 3000 g 離心 30 分鐘，去除不溶性細(xì)胞碎片，上清轉(zhuǎn)移到一只新管中，加入 DTT 終濃度1mmol/L。純化融合蛋白：
    9.細(xì)胞裂解物與適量 50%谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂勻漿混和，每 100 毫升細(xì)菌培養(yǎng)物加 2ml 樹脂，于室溫輕搖 30min。
    10.混合物于 4℃以 500 g 離心 5 分鐘，小心去掉上清并留樣少許進(jìn)行 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳。
    11.沉淀中加入 10 倍柱床體積的冷的 PBS，顛倒離心管數(shù)次混勻，洗去未與樹脂結(jié)合的蛋白。
    12.4℃以 500 g 離心 5 分鐘，小心去掉上清并留樣少許進(jìn)行 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳。
    13.重復(fù)步驟 11 和 12 兩次。
    14.結(jié)合的 GST 融合蛋白可用谷胱甘肽洗脫液洗脫， 也可用凝血酶、 腸激酶或 Xa 因子切割， 釋放靶蛋白。用谷胱甘肽洗脫融合蛋白 ：
    a.沉淀中加入 1 倍柱床體積的谷胱甘肽洗脫緩沖液，室溫輕輕攪動(dòng) 10min，洗脫樹脂上結(jié)合的蛋白。
    b. 4℃以 500 g 離心 5 分鐘，上清（含洗脫的融合蛋白）移新管中。
    c.重復(fù)步驟 a 和 b 兩次，合并 3 次上清。

蛋白酶解從結(jié)合的 GST  融合蛋白上回收靶蛋白 ：
    a.  在結(jié)合了融合蛋白的樹脂中加入凝血酶、腸激酶或 Xa 因子（根據(jù)融合蛋白中的位點(diǎn)選擇） ，每 ml樹脂加入 50 單位溶于 1mlPBS 的蛋白酶。顛倒離心管數(shù)次混勻，室溫下振蕩 2—16 小時(shí)。用小規(guī)模實(shí)驗(yàn)確定時(shí)間。
    b.4℃以 500 g 離心 5 分鐘，上清小心移新管中。 （GST 仍結(jié)合在樹脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分離）
   15.10% SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳分析每一步樣品的蛋白質(zhì)組成。

試劑配制：
谷胱甘肽洗脫緩沖液：10mmol/L 還原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl (pH8.0)

相關(guān)產(chǎn)品 ：
P2010 His 標(biāo)簽純化樹脂（ Ni-NTA Resin ）
T1150  1M Tris-HCl(PH=8.0)
P1300  SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒
PR1600 預(yù)染低分子量蛋白 MARKER
PC0020 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒
P0100  PMSF(100mM)
L1080  溶菌酶（ 100mg/ml ）
I1020  IPTG  溶液 (50mg/ml)

蛋白質(zhì)純化試劑GST標(biāo)簽純化樹脂（GST Resin）產(chǎn)品訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。
 

運(yùn)輸說明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。