歡迎光臨北京索萊寶科技有限公司網站!
          銷售咨詢熱線:
          18101056239
          產品目錄
          您的位置: 網站首頁 > 產品中心 > 生化檢測試劑盒-常量法 > 三羧酸循環系列 > BC4480-50T/48S順烏頭酸酶活性檢測試劑盒 三羧酸
          • 順烏頭酸酶活性檢測試劑盒 三羧酸
          產品名稱:

          順烏頭酸酶活性檢測試劑盒 三羧酸

          產品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
          廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2024-04-16
          儲存條件
          -20℃
          中文名稱
          順烏頭酸酶活性檢測試劑盒 三羧酸
          有效期
          6個月
          單位

          英文名稱
          Aconitase(ACO)Activity Assay Kit
          檢測方法
          紫外分光光度法 Spectrophotometer
          規格
          50T/48S

          產品概述

          品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
          分子式詳詢純度詳詢
          分子量詳詢貨號BC4480
          規格50T/48S供貨周期現貨
          主要用途順烏頭酸酶活性檢測應用領域環保,化工,生物產業,農林牧漁,綜合

          順烏頭酸酶(ACO)活性檢測試劑盒說明書

          紫外分光光度法

          貨號BC4480

          規格50T/48S

          產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

          試劑名稱

          規格

          保存條件

          試劑一

          液體80 mL×1

          2-8℃保存

          試劑二

          液體35 mL×1

          2-8℃保存

          試劑三

          液體0.6 mL×2

          -20℃保存

          試劑四

          液體50 mL×1

          2-8℃保存

          溶液的配制:

          1、試劑三:易揮發試劑,使用后盡快擰緊蓋子,密封后放入-20保存

          產品說明:

          順烏頭酸酶(Aconitase, ACO)是細胞內一種重要的鐵硫蛋白酶,主要存在于胞漿與線粒體中。ACO催化細胞內檸檬酸經中間產物順烏頭酸生成異檸檬酸的可逆反應,對維持三羧酸循環及乙醛酸循環的順利進行起著重要作用。

          順烏頭酸酶催化異檸檬酸生成順烏頭酸,順烏頭酸在240nm有特征吸收峰,通過檢測順烏頭酸的產生速率來計算該酶活性。

          注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

          需自備的儀器和用品:

          紫外分光光度計、低溫臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、超聲波細胞破碎儀、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

          操作步驟:

          一、順烏頭酸酶的提取(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

          A、總順烏頭酸酶的提取

          稱取約0.1 g組織或收集500萬個細胞(細菌),加入1mL試劑一與10μL試劑三,用勻漿器或研缽于冰上勻漿。將勻漿置于冰上超聲波破碎(功率300W,超聲3秒,間隔9秒,重復15次),4℃11000×g離心15min,取上清置于冰上待測(若以蛋白濃度計算,則需留出足夠量來測定蛋白濃度Cpr1)。用于測定總順烏頭酸酶活性(建議將樣本用蒸餾水稀釋4 -10倍后檢測)。

          B、胞漿與線粒體順烏頭酸酶的提取

          (1) 稱取約0.3 g組織或收集1500萬個細胞,加入1.5mL試劑一與15μL試劑三,用勻漿器或研缽于冰上勻漿。

          (2) 4℃600×g離心5min。(若以蛋白濃度計算,則需留出足夠量來測定蛋白濃度Cpr2

          (3) 將上清液移至另一離心管中,4℃11000×g離心15min

          (4) 上清液即胞漿提取物,用于測定胞漿中的順烏頭酸酶活性(建議將樣本用蒸餾水稀釋4-10倍后檢測)。

          (5) 在沉淀中加入600μL試劑二與6μL試劑三,置于冰上超聲波破碎(功率300W,超聲3秒,間隔9秒,重復15次),4℃5000×g離心2min,取上清置于冰上待測。用于測定線粒體中順烏頭酸酶活性(建議將樣本用蒸餾水稀釋4-10倍后檢測)。

          注意:根據實驗需要選擇性提取細胞總順烏頭酸酶、胞漿烏頭酸酶或線粒體烏頭酸酶。

          二、測定步驟

          1. 紫外分光光度計預熱30min以上,調節波長至240nm,蒸餾水調零。

          2. 樣本測定

          (1) 將試劑四25℃預熱15 min以上;

          (2) 1mL石英比色皿中分別加入:

          試劑名稱(μL

          測定管

          試劑四

          900

          樣本

          100

          加入樣本即開始計時,立即混勻,于240nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于25℃水浴鍋或恒溫培養箱中反應5min,迅速取出比色皿并擦干,記錄5min10s時的吸光度A2,計算ΔA=A2-A1

          三、順烏頭酸酶活性的計算

          1、總順烏頭酸酶活性計算:

          1)按樣本蛋白濃度計算

          酶活定義:每mg組織蛋白每分鐘凈生產1nmol順烏頭酸定義為一個酶活力單位。

          ACO酶活(U/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×106]÷(V×Cpr1) ÷T×N=555.55×ΔA÷Cpr1×N

          (2) 按樣本質量計算

          酶活定義:每g組織在反應體系中每分鐘凈生產1nmol順烏頭酸定義為一個酶活力單位。

          ACO酶活(U/g 質量)=[ΔA×V反總÷ε×d×106]÷(V÷V提取×W÷T×N=561.11×ΔA÷W×N

          (3) 按照細菌或細胞數量計算

          酶活定義:每104個細菌或細胞在反應體系中每分鐘凈生產1nmol順烏頭酸定義為一個酶活力單位。

          ACO酶活(U/104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×10 6]÷(V÷V提取×細胞數量(萬個))÷T×N

          =561.11×ΔA÷細胞數量(萬個)×N

          V反總:反應體系總體積,1×10-3Lε:順烏頭酸消光系數,3.6 L/mmol/cmd:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.1mLV提取:樣本總體積,1.01mLT:反應時間,5minCpr1:樣本蛋白質濃度,mg/mL106:單位換算系數,1mmol=1×106nmolN:稀釋倍數W:樣本質量,g

          2、胞漿順烏頭酸酶活性計算:

          1) 按樣本蛋白濃度計算

          酶活定義:每mg組織蛋白每分鐘凈生產1nmol順烏頭酸定義為一個酶活力單位。

          ACO酶活(U/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×106]÷(V×Cpr2) ÷T×N=555.55×ΔA÷Cpr2×N

          (2) 按樣本質量計算

          酶活定義:每g組織在反應體系中每分鐘凈生產1nmol順烏頭酸定義為一個酶活力單位。

          ACO酶活(U/g 質量)=[ΔA×V反總÷ε×d×106]÷(V÷V提取×W÷T×N=841.67×ΔA÷W×N

           

          3) 按照細菌或細胞數量計算

          酶活定義:每104個細菌或細胞在反應體系中每分鐘凈生產1nmol順烏頭酸定義為一個酶活力單位。

          ACO酶活(U/104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×106]÷V÷V提取×細胞數量(萬個)÷T×N

          =841.67×ΔA÷細胞數量(萬個)×N

          V反總:反應體系總體積,1×10-3Lε:順烏頭酸消光系數,3.6 L/mmol/cmd:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.1mLV提取:胞漿樣本總體積,1.515mLT:反應時間,5minCpr2:樣本蛋白質濃度,mg/mL106:單位換算系數,1mmol=1×106nmolN:稀釋倍數W:樣本質量,g

          3、線粒體順烏頭酸酶活性計算:

          1) 按樣本蛋白濃度計算

          酶活定義:每mg組織蛋白每分鐘凈生產1nmol順烏頭酸定義為一個酶活力單位。

          ACO酶活(U/mg prot)= [ΔA×V反總÷ε×d×106]÷(V×Cpr2) ÷T×N= 555.55×ΔA÷Cpr2×N

          2按樣本質量計算

          酶活定義:每g組織在反應體系中每分鐘凈生產1nmol順烏頭酸定義為一個酶活力單位。

          ACO酶活(U/g質量)=[ΔA×V反總÷ε×d×106]÷(V÷V樣總×W÷T×N=336.67×ΔA÷W×N

          (3) 按照細菌或細胞數量計算

          酶活定義:每104個細菌或細胞在反應體系中每分鐘凈生產1nmol順烏頭酸定義為一個酶活力單位。

          ACO酶活(U/104 cell)=[ΔA×V反總÷ε×d×106]÷V÷V樣總×細胞數量(萬個))÷T×N

          =336.67×ΔA÷細胞數量(萬個)×N

          V反總:反應體系總體積,1×10-3Lε:順烏頭酸消光系數,3.6L/mmol/cmd:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.1mLV樣總:線粒體樣本總體積,0.606mLT:反應時間,5minCpr2:樣本蛋白質濃度,mg/mL106:單位換算系數,1mmol=1×106nmolN:稀釋倍數W:樣本質量,g

          注意事項:

          1、 A大于1時,建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進行測定,并在計算時乘以相應的稀釋倍數。

          2、 ΔA小于0.01時,可適當延長反應時間,并在計算時將實際反應時間(T)帶入計算公式。

          3、 測定蛋白濃度時,由于試劑一本身含有蛋白(約1 mg/mL),所以測定時需要扣除此部分蛋白。

          實驗實例:

          1. 0.1g黑麥草樣本,加入1mL試劑一與10μL試劑三進行總順烏頭酸酶的提取,取上清稀釋4倍,測得ΔA=A2-A1=0.589-0.571=0.018,按樣本質量計算總順烏頭酸酶的酶活得:

          ACO酶活(U/g 質量)=561.11×ΔA÷W×N=403.999 U/g 質量。

          2. 0.1g兔子腎臟樣本,加入1mL試劑一與10μL試劑三進行總順烏頭酸酶的提取,取上清稀釋8倍,測得ΔA=A2-A1=0.414-0.383=0.031,按樣本質量計算總順烏頭酸酶的酶活得:

          ACO酶活(U/g 質量)=561.11×ΔA÷W×N=1391.553 U/g 質量。

          相關系列產品:

          BC0710/BC0715  α-酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒

          BC0950/BC0955  琥珀酸脫氫酶(SDH)活性檢測試劑盒

          BC0380/BC0385  丙 酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒

          BC2160/BC2165  線粒體異檸檬酸脫氫酶活性檢測試劑盒

          順烏頭酸酶活性檢測試劑盒 三羧酸 順烏頭酸酶活性檢測試劑盒 三羧酸

          留言框

          • 產品:

          • 您的單位:

          • 您的姓名:

          • 聯系電話:

          • 常用郵箱:

          • 省份:

          • 詳細地址:

          • 補充說明:

          • 驗證碼:

            請輸入計算結果(填寫阿拉伯數字),如:三加四=7
          少妇人妻无码精品视频| 国产精品永久免费| 九九热在线视频精品| 精品无码久久久久久尤物| 国产一成人精品福利网站| 国产精品亚洲精品日韩已方| 中文字幕日韩欧美一区二区三区| 国产精品白丝喷水在线观看| 亚洲精品蜜夜内射| 国产成人精品日本亚洲11 | 99精品免费观看| 久久福利青草精品资源站免费| 久久久精品久久久久特色影视| 亚洲精品456播放| 免费看一级毛片在线观看精品视频| 亚洲日韩中文字幕日韩在线 | 国产午夜精品一二区理论影院| 亚洲国产精品不卡毛片a在线| 精品香蕉伊思人在线观看| 日韩视频在线观看| 日韩精品无码区免费专区| 久久亚洲日韩看片无码| 日韩在线观看免费| 网友偷拍日韩精品| 中文字幕日韩理论在线| 日韩乱码人妻无码系列中文字幕| 1024日韩看片四虎紧急入口| 2021日韩麻豆| 精品视频一区二区三区在线播放| 这里只有精品视频在线| 精品一区二区三区无码免费直播| 日韩成人国产精品视频| 精品特级一级毛片免费观看 | 91天堂素人精品系列全集亚洲| 99国产精品自在自在久久| 99re热这里只有精品视频| 97精品人人妻人人| 91精品成人免费国产片| 国产精品成人va在线观看| 一区国产传媒国产精品| 亚洲精品无码久久久久久|