檸檬酸（CA）含量測(cè)試盒 三羧酸循環(huán)

檸檬酸（CA）含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào)：BC2150
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑三：為易揮發(fā)試劑，用完后盡快密封，-20℃保存；

2. 試劑四：臨用前取1瓶加入3 mL試劑一，充分溶解，用不完的試劑2-8℃保存一周。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：2 μmol/mL檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說(shuō)明：
CA是生物體內(nèi)常見(jiàn)的有機(jī)酸，是重要的食品風(fēng)味物質(zhì)。此外，CA是三羧酸循環(huán)第一步反應(yīng)的產(chǎn)物。
酸性條件下，檸檬酸還原Cr⁶⁺生成Cr³⁺，在545nm處有特征吸收峰；通過(guò)測(cè)定545nm吸光值的增加，即可計(jì)算出樣本中檸檬酸含量。

技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：0.02 μmol/mL
線性范圍：0.032-4 μmol/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：
1、樣本處理等過(guò)程均需要在冰上進(jìn)行。
2、試劑五為易致癌物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，需佩戴手套，避免試劑五濺到皮膚上。
3、檸檬酸試劑一不能用于蛋白含量測(cè)定，如需測(cè)定蛋白含量，需另取組織進(jìn)行測(cè)定。
4、若反應(yīng)30min后有明顯的黑色小顆粒，屬于正?，F(xiàn)象，需將樣本稀釋后再測(cè)。
5、如果樣本吸光值大于0.5，建議將樣本用試劑一稀釋后進(jìn)行測(cè)定。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1065g 竹子葉片加入1mL試劑一，冰上充分研磨，11000g，4℃離心10min，取上清液按照測(cè)定步驟操作，測(cè)并計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A空白管=0.281-0.130=0.151，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.438-0.130=0.308，

按樣本質(zhì)量計(jì)算得：
檸檬酸含量（μmol/g 質(zhì)量）=2×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W =9.21 μmol/g 質(zhì)量。

1. 取0.1094g兔腎臟組織加入1mL試劑一，冰上充分研磨，11000g，4℃離心10min，取上清液按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A空白管=0.440-0.130=0.310，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.438-0.130=0.308，按樣本質(zhì)量計(jì)算得：

檸檬酸含量（μmol/g 質(zhì)量）=2×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W =18.40 μmol/g 質(zhì)量。

1. 取0.1mL兔血清加試劑一0.9mL，充分混勻，11000g，4℃離心10min，取上清液按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A空白管=0.271-0.130=0.141，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.438-0.130=0.308，按液體樣本的體積計(jì)算：

檸檬酸含量（μmol/mL）=20×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=9.156 μmol/mL。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Meixi Peng,Dan Yang,Yixuan Hou,et al. Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis. Cell Death and Disease.March 2019;(IF5.959)

2. Luo M,Luo Y, Mao N,et al. Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication. Cellular Physiology and Biochemistry. November 2018;

3. Zhou Z, Duan Y, Zhou M. Carbendazim‐resistance associated β2‐tubulin substitutions increase deoxynivalenol biosynthesis by reducing the interaction between β2‐tubulin and IDH3 in Fusarium graminearum[J]. Environmental microbiology, 2019.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0710/BC0715  α-酮戊二酸脫氫酶（α-KGDH）活性檢測(cè)試劑盒
BC0950/BC0955  琥珀酸脫氫酶（SDH）活性檢測(cè)試劑盒
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