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          • 果膠含量試劑盒 抗氧化
          產品名稱:

          果膠含量試劑盒 抗氧化

          產品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
          廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2024-04-15
          儲存條件
          -20℃
          中文名稱
          果膠含量試劑盒 抗氧化
          有效期
          6個月
          單位

          英文名稱
          Pyruvate Decarboxylase(PDC) Activity Assay Kit
          檢測方法
          紫外分光光度法 Spectrophotometer
          規格
          50T/48S

          產品概述

          品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
          分子式詳詢純度詳詢
          分子量詳詢貨號BC1400
          規格50T/48S供貨周期現貨
          主要用途丙酮酸脫羧酶(PDC)測試盒,PDC以丙酮酸為底物催化 NADH 氧化生成NAD應用領域環保,化工,生物產業,農林牧漁,綜合

          丙酮酸脫羧酶(PDC)活性檢測試劑盒說明書

          紫外分光光度法

          注意:本產品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

          貨號:BC1070

          規格:50T/48S

          產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

          試劑名稱

          規格

          保存條件

          提取液

          液體60 mL×1

          2-8℃保存

          試劑一A

          液體28 mL×1

          2-8℃保存

          試劑一B

          粉劑×1

          -20℃保存

          試劑一C

          液體2mL×1

          2-8℃保存

          試劑二A

          液體7 mL×1

          2-8℃保存

          試劑二B

          粉劑×1

          -20℃保存

          試劑二C

          粉劑×1

          -20℃保存

          試劑三

          液體20 mL×1

          2-8℃保存

          溶液的配制:

          1、 提取液:內含不溶物,使用前搖勻

          2、 試劑一的配制:臨用前配制,將試劑一B、試劑一C加入到試劑一A中并充分溶解。-20分裝保存,可保存4周,避免反復凍融

          3、 試劑二B:臨用前加入0.6mL蒸餾水溶解,用不完的試劑-20分裝保存4,避免反復凍融

          4、 試劑二C:臨用前加入1mL蒸餾水溶解,用不完的試劑-20分裝保存4,避免反復凍融

          5、 試劑二的配制:臨用前配制,取2.625mL試劑二A0.225mL試劑二B0.15mL試劑二C混合(共3mL,約30T),現用現配。

          產品說明:

          PDC主要存在于酵母中,是乙醇發酵的關鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。

          PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+NADH340nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測定340nm光吸收下降速率,來計算PDC活性。

           


          注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

          需自備的儀器和用品

          臺式離心機、紫外分光光度計、水浴鍋/恒溫培養箱、1mL石英比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

           

          操作步驟:

          一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

          1、細胞或細菌樣本的制備:先收集細胞或細菌樣本到離心管內,棄上清,按照每500萬細胞或細菌加入1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率200W,超聲3s,間隔10s,重復30次)。16000g4℃離心20min,取上清,置冰上待測。

          2、組織樣本:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液,冰上充分研磨。16000g4℃離心20min,取上清,置冰上待測。

          3、血清(漿)樣本:直接檢測。

          二、測定步驟

          1、 紫外分光光度計預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。

          2、 根據樣本數取適量試劑一、試劑三37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)水浴提前預熱30min

          3、 操作表:

          試劑名稱(μL

          測定管

          空白管

          試劑一

          500

          500

          試劑三

          300

          300

          試劑二

          100

          100

          樣本

          100

          -

          蒸餾水

          -

          100

          在比色皿中加入上述試劑后迅速混勻后于340nm比色,記錄10s70s的吸光值,測定管的記為A1A2,空白管的記為A3A4,計算ΔA=A1-A2-A3-A4)。(空白管只需做1-2次)

          三、PDC活性計算

          1、血清(漿)PDC活力的計算:

          單位的定義:37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)中,每毫升血清(漿)在反應體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個酶活力單位。

          PDCU/mL=ΔA×V反總÷(ε×d)×106÷V樣本÷T=1.6×ΔA

          2、 按樣本蛋白濃度計算:

          單位的定義:37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)中,每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個酶活力單位。

          PDCU/mg prot=ΔA×V反總÷(ε×d)×106÷(V樣本×Cpr)÷T=1.6×ΔA÷Cpr

          3按樣本質量計算:

          單位的定義:37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)中,每g組織質量在反應體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個酶活力單位。

          PDCU/g 質量)=ΔA×V反總÷(ε×d)×106÷ (W÷V提取×V樣本)÷T=1.6×ΔA÷W

          4細菌或細胞中PDC活力的計算:

          單位的定義:37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)中,每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘催化1μmolNADH氧化定義為一個酶活力單位。

          PDCU/104 cell=ΔA×V反總÷(ε×d)×106÷(V樣本÷V提取×N)÷T=1.6×ΔA÷N

           

           

           

          εNADH摩爾消光系數,6.22×103L/mol/cmd:比色皿光徑,1cmV反總:反應體系總體積,1mL=0.001LV樣本:加入反應體系中上清液體積,0.1mLCpr:蛋白濃度(mg/mL),需要另外測定;T:反應時間,1minW:樣本質量,gV提取:提取液體積,1mL106:單位換算系數,1mol=106μmolN:細胞或細胞數量,以萬計

          注意事項:

          1、 實驗時,試劑二和樣本在冰上放置,以免變性和失活。

          2、 比色皿中反應液的溫度必須保持37℃25℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃25℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。

          3、 最好兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結果的準確性。

          4、 如果1分鐘變化值較小可延長反應時間,同時注意修改計算公式。

          實驗實例:

          1、 0.1g綠蘿葉加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清,之后按照測定步驟操作,用1mL石英比色皿測得計算ΔA=A1-A2-A3-A4=0.945-0.93-0.716-0.714=0.013,按樣本質量計算酶活得:

          PDCU/g 質量)=1.6×ΔA÷W=1.6×0.013÷0.1=0.208 U/g 質量。

          2、 0.1g小鼠肝臟加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清用蒸餾水稀釋40倍后按照測定步驟操作,用1mL石英比色皿測得計算ΔA=A1-A2-A3-A4=0.602-0.322-0.716-0.714=0.278,按樣本質量計算酶活得:

          PDCU/g 質量)=1.6×ΔA÷W=1.6×0.278÷0.1×40(稀釋倍數)=177.92 U/g 質量。

          相關發表文獻:

          Chong Li, Shi Gao, Xiaotong Li, et al. Efficient metabolic evolution of engineered Yarrowia lipolytica for succinic acid production using a glucose-based medium in an in situ fibrous bioreactor under low-pH condition. Biotechnology for Biofuels. August 2018; (IF5.452)

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