NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)活性檢測(cè)試劑盒 輔酶

NAD-蘋果酸酶（NAD-ME）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
紫外分光光度法
貨號(hào)：BC1130
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入20 mL提取液充分溶解備用；

2. 試劑三：臨用前每支加1 mL雙蒸水充分溶解備用；

3. 試劑四：用時(shí)每支加500 μL雙蒸水充分溶解備用；

4. 工作液：在15 mL試劑二中加入2 mL試劑三和1 mL試劑四，可以根據(jù)比例現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說(shuō)明：
ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng)，產(chǎn)生*酸和CO₂，以及伴隨NAD(P)⁺的還原反應(yīng)，是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來(lái)植物ME活性測(cè)定較多，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對(duì)底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。
NAD-ME催化NAD⁺還原成NADH，在340nm下測(cè)定NADH增加速率。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。

操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g肝加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清，按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.929-0.665=0.264，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

NAD-ME（U/g 質(zhì)量）=965×ΔA÷W=965×0.264÷0.1=2547.6 U/g 質(zhì)量。
參考文獻(xiàn)：

1. Spampinato C P, Colombo S L, Andreo C S. Interaction of analogues of substrate with NADP-malic enzyme from maize leaves[J]. Photosynthesis research, 1994, 39(1): 67-73.

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