乳酸脫氫酶（LDH）活性檢測試劑盒 輔酶系列

乳酸脫氫酶(LDH)活性檢測試劑盒 輔酶系列

貨號：BC0680

規格：50管/24樣

產品內容：

提取液：30mL×1瓶， 4℃保存；

試劑一：液體25 mL×1瓶， 4℃保存；

試劑二：粉劑×1支，-20℃保存，用時加入1.3 mL雙蒸水充分溶解備用，配好后可分裝成小管-20 ℃保存，可保存兩周，禁止反復凍融；

試劑三：液體25 mL×1瓶，4℃保存；

試劑四：液體60 mL×1瓶，4℃保存；

丙酮酸鈉標準液：液體1 mL×1支，4℃保存，2mmol/ml。

產品簡介：

   LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應，伴隨著NAD⁺/NADH之間互變。

   LDH催化NAD⁺氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

試驗中所需的儀器和試劑：

   可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品測定的準備：  

• 細菌或培養細胞：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清，按照細菌或細胞數量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500-1000:1 的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次），8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

• 組織：按照組織質量（g）：提取液體積（mL）為1:5-10 的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

• 血清（漿）樣品：直接檢測。

• 丙酮酸鈉標準液：取100ml標準液，倍比稀釋1、0.5、0.25、0.125、0 mmol/ml，用2、1、0.5、0.25、0.125、0 mmol/ml標準液做標準曲線。

• 
  

二、測定操作：

• 分光光度計預熱30min以上，調節波長450nm，蒸餾水調零。

• 樣本測定（在EP管中加入下列試劑）

充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴15min

充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴15min

充分混勻，室溫靜置3min，450 nm下測定吸光度，樣品計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需要設一個對照管。

根據標準管測定值和濃度做標準曲線，y為標準品濃度，μmol/mL；x為對吸光度。

LDH活力單位計算：

1、計算樣品丙酮酸的含量，即將ΔA（x） 帶入回歸方程中，計算y 值（μmol/mL）

2、血清（漿）LDH活力的計算

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH（U/mL）=y÷T×10³=66.7×y

3、細胞、細菌和組織中LDH活力的計算

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH（U/mg prot）= y÷T÷Cpr×10³ =66.7×y÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。

（2） 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH（U/g鮮重）= y÷T÷W×10³ =666.7×y

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。

LDH（U/10⁴ cell）= y÷T÷500×10³ =0.133×y

T：反應時間，15 min；Cpr：蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，0.1g; 500：細胞或細菌總數，500萬；10³：1μmol/mL=10³nmol/mL。

相關文獻：

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《Involvement of the two l-lactate dehydrogenase in development and pathogenicity in Fusarium graminearum》 作者:Wenchan ChenLingling WeiYu ZhangDongya ShiWeichao RenZhihui ZhangJin WangWenyong ShaoXiali LiuChangjun ChenEm ail authorQingli Gao 期刊:Curr Genet 影響因子:3.464 PMID:30474697
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