Caspase-1活性測定試劑盒 比色法

Caspase-1活性檢測試劑盒說明書
比色法
貨號：BC3810
規格：20T、50T、100T
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：分裝-20℃保存。

2. 試劑二：分裝-20℃保存。

3. 標準液：pNA標準溶液，5 mmol/L。標準溶液在4℃條件下為渾濁狀態，溶解即可變為澄清狀態，不影響使用。

4. 標準品稀釋液配制：取9 mL試劑一加入1 mL試劑二，充分混勻待用。（也可按照試劑一：試劑二=9:1的比例，自行配制）。

產品說明：
Caspase是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含10多個成員。Caspase-1是可剪切 IL-1b和IL-18前體產生活性細胞因子的caspase。Caspase-1通過剪切Bcl-XL調節細胞凋亡，并通過對細胞因子前體的剪切來調控相關細胞因子介導的免疫炎性反應。基于Caspase-1特異水解多肽底物Tyr-Val-Ala-Asp-p-nitroanilide (YVAD-pNA)，釋放的游離硝 基苯胺pNA在405 nm有最大吸收峰。采用可見光光度比色法測定pNA而得到Caspase活性。適用于檢測哺乳動物組織、細胞Caspase-1活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、100μL玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、可調式移液器、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體的操作步驟請見“產品資料"文件

注意事項：
1、由于試劑二一中含有還原劑（DTT），建議將樣品用水稀釋2倍后，用Bradford法測定蛋白濃度，以降低DTT對蛋白濃度測定的干擾。不建議使用BCA法測定蛋白濃度。
2、Caspase活性測定值低最常見的原因是細胞未發生凋亡或細胞量太少，其次是觀測時間不恰當。誘導凋亡時，并非劑量越大時間越長Caspase活性就越高。建議設置不同劑量和時間點如0、2、4、8、16、24小時，以檢測最佳的觀察點。
3、所測樣本的值高于標準曲線，可用試劑二稀釋樣本后重新測定。
4、蓋緊96孔板蓋子并用封口膜密封。37oC孵育，肉眼可見顏色變黃時的OD405值約為0.2，此時即可測定。顏色變化不明顯可延長反應或過夜，但酶活性較強時，孵育時間過長將導致反應失去線性關系。
相關發表文獻：

1. Ren N, Jiang T, Wang C, et al. LncRNA ADAMTS9-AS2 inhibits gastric cancer (GC) development and sensitizes chemoresistant GC cells to cisplatin by regulating miR-223-3p/NLRP3 axis[J]. Aging (Albany NY), 2020, 12(11).

2. Chai D, Qiu D, Zhang Z, et al. Ab sent in melanoma 2 enhances anti‐tumour effects of CAIX promotor controlled conditionally replicative adenovirus in renal cancer[J]. Journal of Cellular and Molecular Medicine, 2020.

3. Liao T, Ding L, Wu P, et al. Chrysin Attenuates the NLRP3 Inflammasome Cascade to Reduce Synovitis and Pain in KOA Rats[J]. Drug Design, Development and Therapy, 2020, Volume 14:3015-3027.

參考文獻：

1. Cohen GM. Caspases: the executioners of apoptosis. Biochem J, 1997, 326: 1-16.

2. Janicke R U, Sprengart M L, Wati M R, et al. Emerging role of caspase-3 in apoptosis[J]. Cell Death and Differentiation, 1999, 6:99-104.

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