基因工程試劑 DH5α感受態細胞

基因工程試劑 DH5α感受態細胞
貨 號：C1100
規 格：10×100ul / 20×100ul
保 存：-70℃保存，運輸為干冰包裝。自收貨之日起液氮保存少一年，-70℃保存少6個月。

產品簡介：
    本公司生產的DH5α感受態細胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝制備得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19 質粒檢測，轉化效率可達 10 8 ，-70℃保存 3-5 個月轉化效率不發生改變。
    基因型: supE44△lacU169（φ80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1
特 點: 一種用于鋪制與培養質粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的產物可與 pUC 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現 β 互補，可用于藍白斑篩選。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）

1、將感受態細胞置于冰上融化，以下實驗以 100ul 感受態細胞為例。
2、向感受態細胞懸液中加入需轉化的目的 DNA，注意目的 DNA 的體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，冰浴放置 30 分鐘。
3、將離心管置于 42℃水浴中 60-90 秒，然后快速轉移到冰浴中放置 2-3 分鐘，注意不要搖動離心管。
4、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的 SOC 或 LB 培養基，37℃ 180rpm 振蕩培養 1 小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5、取適量已轉化的感受態細胞涂布含相應抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培養 12-16 小時。涂布用量可根據具體實驗來調整，如轉化的 DNA 總量較多，可取 100ul 左右的轉化產物涂板；反之，如轉化的 DNA總量較少，可取 200-300ul 的轉化產物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事項：

1、感受態細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。
2、實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它 DNA 或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。
3、轉化時，轉化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源 DNA 量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時 DNA 體積要小于感受態細胞體積的十分之一。
4、轉化率的計算：轉化率＝產生菌落的總數/鋪板 DNA 總量。
5、為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產物，以重新轉化，將損失降到低。

相關產品：

I1020  IPTG  溶液 (50mg/ml)
A1170 氨芐青霉素儲存液 (100mg/ml)
K1030  Kanamycin (100mg/ml) 卡那霉素
L1015  LB 固體培養基 ( 干粉 )
L1020  SOC 液體培養基 ( 干粉 )
X1010  X-gal(20mg/ml)

相關文獻：

《Production of l-alanyl-l-glutamine by immobilized Pichia pastoris GS115 expressing α-amino acid ester acyltransferase》 作者:Yi-Min Li, Jiao-Qi Gao, Xu-Ze Pei, Cong Du, Chao Fan, Wen-Jie Yuan and Feng-Wu Bai 期刊:Microbial Cell Factories 影響因子:4.402 PMID:30711013
 

基因工程試劑 DH5α感受態細胞訂購說明：

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運輸說明：

1、極低溫產品：極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品：低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
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