基因工程試劑BL21（DE3）pLysS感受態細胞

基因工程試劑BL21（DE3）pLysS感受態細胞
貨號：C1500
規格：10×100ul / 20×100ul
保存：-70℃保存，干冰運輸。自收貨之日起液氮保存少一年，-70℃保存少 6 個月。
 

產品簡介：
    本公司生產的BL21（DE3）pLysS感受態細胞是采用大腸桿菌BL21（DE3）pLysS菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19 質粒檢測，轉化效率可達 10 7 ，-70℃保存 6 個月轉化效率不發生改變。
    基因型：F-, ompT, hsdSB(rB-mB-), dcm, gal(DE3), pLysS, Cmr
    特點：該菌株帶有質粒 pLysS，因此具有氯霉素抗性。質粒 pLysS 含有表達 T7 溶菌酶的基因，能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾目的蛋白的表達。該菌適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。

操作方法：（以下各步驟均為無菌操作）

1、將感受態細胞置于冰上融化，以下實驗以 100ul 感受態細胞為例。
2、向感受態細胞懸液中加入需轉化的目的 DNA，注意目的 DNA 的體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，冰浴放置 30 分鐘。
3、將離心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒，然后快速轉移到冰浴中放置 2-3 分鐘，不要搖動離心管。
4、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的 SOC 或 LB 培養基，37℃ 150rpm 振蕩培養 1 小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5、取適量已轉化的感受態細胞涂布含相應抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培養 12-16 小時。涂布用量可根據具體實驗來調整，如轉化的 DNA 總量較多，可取 100ul 左右的轉化產物涂板；反之，如轉化的 DNA總量較少，可取 200-300ul 的轉化產物涂板。如果預計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事項：

1、實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它 DNA 或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。
2、感受態細胞不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。
3、轉化時，轉化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源 DNA 量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時 DNA 體積要小于感受態細胞體積的十分之一。
4、為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產物，以重新轉化，將損失將到低。
 

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2、低溫產品：低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
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