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          • 肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法
          產品名稱:

          肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法

          產品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
          廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2024-04-12
          儲存條件
          -20℃
          中文名稱
          肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法
          有效期
          6個月
          單位

          推薦
          若使用96孔板測定,需使用96孔UV板,推薦貨號YA0602
          英文名稱
          Cinnamyl Alcohol dehydrogenase Dehydrogenase(CAD) Activity Assay Kit
          檢測方法
          微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader

          產品概述

          品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
          分子式詳詢純度詳詢
          分子量詳詢貨號BC4175-100T/96S
          規格100T/96S供貨周期現貨
          主要用途肉桂醇脫氫酶(CAD)活性檢測應用領域環保,化工,生物產業,農林牧漁,綜合

          肉桂醇脫氫酶(CAD)活性檢測試劑盒說明書
          微量法
          貨號:BC4175
          規格:100T/96S
          產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
          試劑名稱規格保存條件
          提取液液體120 mL×1瓶2-8℃保存
          試劑一粉劑×1-20℃保存
          試劑二液體×12-8℃保存
          試劑三液體25 mL×1瓶2-8℃保存
          溶液的配制:
          1. 提取液:內含不溶物,使用前搖勻。

          2. 試劑一:臨用前加入5 mL試劑三溶解。可溶解后分裝-20保存,避免反復凍融。

          3. 試劑二:液體置于試劑瓶內玻璃管中。臨用前加入15 mL乙醇充分混勻配好后2-8℃保存。

          4. 工作液的配制:將試劑一、試劑二、試劑三按1:1:2(V:V:V)的比例配制工作液,工作液現用現配。

          產品說明:
          CAD 是木質素生物合成途徑中的關鍵酶之一,催化香豆醛、芥子醛以及松柏醛等生成與之相應的肉桂醇。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類中,研究該酶可以探討多種生物細胞發育過程中木質素沉積的代謝機理,為減少水果石細胞含量提高其品質提供依據。
          CAD 催化肉桂醛和NADPH生成肉桂醇和NADP+,在340nm下測定NADPH消耗速率,即可反映CAD活性。

          注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
          需自備的儀器和用品:
          紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋、微量石英比色皿/96UV板、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰、乙醇和蒸餾水。
          操作步驟:
          一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
          1、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后10000g4℃,離心10min,取上清,置冰上待測。
          2、細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
          二、測定步驟
           
          1. 紫外分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調節波長至340nm,紫外分光光度計蒸餾水調零。

          2. 操作表:在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入下列試劑:

          試劑名稱空白管測定管
          樣本(µL)
          20
          蒸餾水(µL)20
          工作液(µL)180180
          在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入上述試劑,充分混勻后于340nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于25℃水浴或培養箱5min(酶標儀有控溫功能可將溫度調至25℃),拿出迅速擦干測定5min10s時的吸光值A2,計算ΔA測定管=A1測定-A2測定,ΔA空白管=A1空白-A2空白,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管(空白管只需做1-2次)。
          三、CAD酶活計算
          A、按微量石英比色皿計算:
          1、按蛋白濃度計算
          酶活定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。
          CAD酶活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×Cpr÷T=321.54×ΔA÷Cpr
          2、按樣本質量計算
          酶活定義:每g組織每分鐘消耗1nmolNADPH定義為一個酶活力單位。
          CAD酶活(U/g 質量)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×W÷V樣總)÷T=321.54×ΔA÷W
          3、按細菌或細胞數量計算
          酶活定義:每104個細菌或細胞每分鐘消耗1nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
          CAD酶活(U/104 cell)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷500×V÷V樣總)÷T= 0.643×ΔA
          εNADPH摩爾消光系數,6.22×103L/mol /cm;d:比色皿光徑,1cmV反總:反應體系總體積,2×10-4L;V樣:反應體系中樣本體積,0.02mLV樣總:加入提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測定;W:樣本質量,gT:反應時間,5min500:細菌或細胞總數,500萬;109:單位換算系數,1mol=109nmol。
          B、按96UV板計算:
          將將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm96孔板光徑)進行計算即可。

          注意事項:
          1. 當A1小于0.8,建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進行測定。

          2. 空白管為檢測各試劑組分質量的檢測孔,正常情況下,變化不超過0.04。

          實驗實例:
          1. 取約0.1g三葉草葉,加入1mL提取液進行冰浴勻漿,然后10000g4℃,離心10min,取上清,按照測定步驟操作,用微量石英比色皿測定計算ΔA測定管= A1測定-A2測定=1.7889-1.7045=0.0844ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.9630-0.9433=0.0197ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.0844-0.0197=0.0647按樣本質量計算得:CAD酶活(U/g 質量)=321.54×ΔA÷W=208.0364 U/g 質量

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          肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法 肉桂醇脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法

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