脯*酸脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法

脯*酸脫氫酶（ProDH）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC4165
規(guī)格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入2.5 mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑2-8℃保存；

2. 試劑三：臨用前加入4 mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑2-8℃保存；

3. 試劑四：臨用前加入5 mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑可分裝-20℃保存，避免反復凍融。

4. 工作液的配制：首先將試劑三和試劑四配成溶液，臨用前根據(jù)用量按照試劑一（V）：試劑二（V）：試劑三（V）=1.6（mL）：0.2（mL）：0.15（mL）的比例充分混勻。（注意：現(xiàn)配現(xiàn)用，用多少配多少）

產品說明：
ProDH是存在于線粒體內的催化脯*酸降解的關鍵酶。降低ProDH活性對于調節(jié)滲透平衡、防止?jié)B透脅迫對植物造成傷害、清除自由基、保護細胞結構具有重要意義。
ProDH催化脯*酸脫氫生成延丙 酮 酸，脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸（PMS）傳遞還原2,6-二氯 酚靛酚（DCPIP），并且在600nm處具有特征吸收峰，通過600nm吸光度的下降，測定2,6-DCPIP的還原速度，代表ProDH活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、丙 酮、勻漿器/研缽、冰、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：

1. ΔA大于0.6時或者A3大于1.5時建議將樣本上清用蒸餾水稀釋后再進行測定。

2. 控制A3在0.8以上（96孔板在0.4以上），若A3小于0.8（用96孔板數(shù)值小于0.4時），建議將樣本上清用蒸餾水稀釋后再進行測定。

3. 空白管為檢測各試劑組分質量的檢測孔，正常情況下，變化不超過0.02。

實驗實例：

1. 取0.1g稗草加入1mL提取液一進行勻漿研磨，對樣本進行處理，取上清稀釋2倍，之后按照測定步驟操作，用微量玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A3-A4=0.8549-0.4798=0.3751，ΔA空白=A1-A2=0.8941-0.8813=0.0128，ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.3751-0.0128=0.3623，按樣本質量計算酶活得：

ProDH（U/g 質量）=333.33×ΔA÷W×稀釋倍數(shù)=333.33×0.3623÷0.1×2=2415.309 U/g 質量。

1. 取0.1g兔子腎臟組織加入1mL提取液一進行勻漿研磨，對樣本進行處理，取上清后按照測定步驟操作，用微量玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A3-A4=0.9369-0.6631=0.2738，ΔA空白=A1-A2=0.8941-0.8813=0.0128，ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.2738-0.0128=0.261，按樣本質量計算酶活得：

ProDH（U/g 質量）=333.33×ΔA÷W=333.33×0.261÷0.1=869.99 U/g 質量。
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