脯*酸脫氫酶活性檢測試劑盒 氨基酸代謝

脯*酸脫氫酶（ProDH）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC4160
規格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入5 mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑2-8℃保存；

2. 試劑三：臨用前加入4 mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑2-8℃保存；

3. 試劑四：臨用前加入10 mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑可分裝-20℃保存，避免反復凍融。

4. 工作液的配制：首先將試劑三和試劑四配成溶液，臨用前根據用量按照試劑一（V）：試劑二（V）：試劑三（V）=1.6（mL）：0.2（mL）：0.15（mL）的比例充分混勻。（注意：現配現用，用多少配多少）

產品說明：
ProDH是存在于線粒體內的催化脯*酸降解的關鍵酶。降低ProDH活性對于調節滲透平衡、防止滲透脅迫對植物造成傷害、清除自由基、保護細胞結構具有重要意義。
ProDH催化脯*酸脫氫生成延丙 酮酸，脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸（PMS）傳遞還原2,6-二氯 酚靛酚（DCPIP），并且在600nm處具有特征吸收峰，通過600nm吸光度的下降，測定2,6-DCPIP的還原速度，代表ProDH活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：
天平、低溫離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、丙 酮、勻漿器/研缽、冰、蒸餾水。

操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件

注意事項：
1、ΔA大于0.6時或者A3大于1.5時建議將樣本上清用蒸餾水稀釋后再進行測定。
2、控制A3在0.8以上，若A3小于0.8，建議將樣本上清用蒸餾水稀釋后再進行測定。
3、空白管為檢測各試劑組分質量的檢測孔，正常情況下，變化不超過0.02。

實驗實例：

1. 取0.1g稗草加入1mL提取液一進行勻漿研磨，對樣本進行處理，取上清稀釋2倍，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A3-A4=0.815-0.52=0.295，ΔA空白=A1-A2=0.883-0.879=0.004，ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.295-0.004=0.291，按樣本質量計算酶活得：ProDH（U/g 質量）=333.33×ΔA÷W×稀釋倍數=333.33×0.291÷0.1×2=1939.981 U/g 質量。

2. 取0.1g兔子腎臟組織加入1mL提取液一進行勻漿研磨，對樣本進行處理，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A3-A4=0.94-0.619=0.321，ΔA空白=A1-A2=0.883-0.879=0.004，ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.321-0.004=0.317，按樣本質量計算酶活得：ProDH（U/g 質量）=333.33×ΔA÷W =333.33×0.317÷0.1=1056.656 U/g 質量。

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