酪*酸解氨酶（TAL）活性檢測試劑盒 抗氧化

酪*酸解氨酶（TAL）活性檢測試劑盒說
明書
紫外分光光度法
貨號：BC4060
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
試劑二：臨用前取1瓶加入5 mL蒸餾水和20 μL濃鹽酸（37%）充分溶解待用。現(xiàn)配現(xiàn)用。2-8℃保存4周。
產(chǎn)品說明：
酪*酸解氨酶（TAL）廣泛存在于植物和微生物中，是苯丙*酸次生代謝途徑的關(guān)鍵酶之一。TAL能夠躍過肉桂酸-4-羥基化酶（C4H）直接將酪*酸轉(zhuǎn)化為香豆酸，香豆酸可進(jìn)一步生成白藜蘆醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素類天然產(chǎn)物。
TAL能夠分解酪*酸產(chǎn)生香豆酸，其在310nm下有吸收峰，根據(jù)吸光度的變化率可計算出TAL活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、細(xì)胞超聲破碎儀、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰、濃鹽酸（37%）和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。12000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、細(xì)胞或細(xì)菌：先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照每500萬細(xì)胞或細(xì)菌加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率200w，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）。12000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟

1. 紫外分光光度計預(yù)熱30min以上，波長調(diào)至310nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 加樣表（在1mL石英比色皿中分別加入）

將上述試劑分別加入比色皿后迅速吹打混勻，記錄第10s的吸光值A1，迅速置于37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）水浴或培養(yǎng)箱中3min，拿出迅速擦干測定3min10s時的吸光值A2，計算ΔA =A2 -A1。
三、TAL酶活計算
1、按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘在310nm下吸光值變化0.01定義為一個酶活性單位。
TAL（U/mg prot）=ΔA÷0.01×V反總÷(V樣×Cpr)÷T=333×ΔA÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算：
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘在310nm下吸光值變化0.01定義為一個酶活性單位。
TAL（U/g 質(zhì)量）=ΔA÷0.01×V反總÷(W÷V提取×V樣)÷T=333×ΔA÷W
3、按細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計算：
單位的定義：每10⁴個細(xì)胞或細(xì)菌在反應(yīng)體系中每分鐘在310nm下吸光度變化0.01定義為一個酶活性單位
TAL（U/10⁴ cell）=ΔA÷0.01×V反總÷(500÷V提取×V樣)÷T=0.667×ΔA
V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣：加入的樣本體積，0.1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V提取：提取液體積，1mL；500：500萬個細(xì)胞；T：反應(yīng)時間，3min。
注意事項：
當(dāng)ΔA大于0.2或者A1大于1.5時，建議將樣本用蒸餾水稀釋后測量；ΔA過小時，建議增加酶促反應(yīng)時間（5min或10min）或增加加入的樣本體積來測定。計算時注意同步修改計算公式。（計算時注意同步修改計算公式）
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g稗草葉加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清稀釋3倍后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A2-A1=0.253-0.243=0.01，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

TAL（U/g 質(zhì)量）=333×ΔA÷W×F（稀釋倍數(shù)）=333×0.01÷0.1×3=99.9 U/g 質(zhì)量。
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