土壤谷氨*胺酶活性檢測試劑盒 微量法

土壤谷氨*胺酶（S-GLS）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC3975
規格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前取1瓶加入6mL蒸餾水溶解，用不完的試劑2-8℃保存一周；

2. 試劑三：臨用前根據樣本量按比例（A:B=1:4）配制，現配現用；若發現變色后則不能再使用；

3. 標準品：10µmol/mL氮標準液。取15μL 10µmol/mL氮標準液，加入945μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.156μmol/mL的標準液待測。（實驗中每管需要80μL，為減小實驗誤差，故配制大體積。）

產品說明：
S-GLS（EC3.5.1.2）存在于某些細菌以及植物根中，催化谷氨*胺水解成谷*酸和氨，在氮素代謝中具有重要調控作用，尤其是調節游離氨含量和尿素代謝。

S-GLS催化谷氨*胺水解成L-谷*酸和氨，利用靛酚藍比色法測定氨增加的速率，即可計算其酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、30~50目篩、研缽、甲苯（不允許快遞）、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30~50目篩。
二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長至630nm，分光光度計用蒸餾水調零。

2. 樣本測定（在EP管中加入下列試劑）

混勻，室溫放置30min，630nm處讀取吸光值A，分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管，計算ΔA測定=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管。標準管與空白管只需測1-2次。

注意事項：

1. 當測定吸光值大于0.8時，建議將上清液用蒸餾水進一步稀釋后測量。計算時乘以稀釋倍數。

2. 離心后若上清液仍含有少量雜質，可將上清液再次10000g，常溫離心10min去除。

實驗實例：

1. 稱取兩管0.05g三葉草土，分別為測定管和對照管，按照測定步驟操作，用96孔板測定吸光值，計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.8-0.175=0.625，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.268-0.044=0.224，計算酶活得：

S-GLS（U/g 土樣）=1.872×ΔA測定÷ΔA標準÷W=1.872×0.625÷0.224÷0.05=104.46 U/g 土樣。

1. 稱取兩管0.05g林土樣，分別為測定管和對照管，按照測定步驟操作，用96孔板測定吸光值，計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.466-0.164=0.302，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.268-0.044=0.224，計算酶活得：

S-GLS（U/g 土樣）=1.872×ΔA測定÷ΔA標準÷W=1.872×0.302÷0.224÷0.05=50.477 U/g 土樣。
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