酸性轉化酶(AI)活性檢測試劑盒 微量法

酸性轉化酶（AI）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC0565
規格：100T/48S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
1、試劑二：臨用前加入20mL試劑一充分溶解備用；用不完的試劑2-8℃保存；
2、標準品：10mg葡萄糖，臨用前加入1mL蒸餾水溶解，制備10mg/mL葡萄糖標準液備用。
產品說明：
蔗糖轉化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代謝關鍵酶之一。根據最適 pH，Ivr分為酸性轉化酶（AI）和中性轉化酶（NI）兩種類型。AI(EC 3.2.1.26)主要存在于細胞液泡或自由空間中，最適 pH 為4.5~5.0（酸性），通過降解液泡中蔗糖，調節液泡中蔗糖的利用和果實內糖類的積累。
AI催化蔗糖降解產生還原糖，進一步與3,5－二硝基水楊酸反應，生成棕紅色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范圍內540nm光吸收增加速率與AI活性成正比。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件   注意事項：
1、如果加入試劑三，煮沸10min后有混濁物出現，建議離心除去沉淀后，取上清測定吸光度；
2、如果吸光值大于1，可以用蒸餾水將樣本稀釋后測定（計算公式中乘以相應稀釋倍數）。
3、由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以在測定樣本蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。
實驗實例：

1. 取0.1g木槿加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定=0.574，ΔA對照=0.378，ΔA=A測定-A對照=0.574-0.378=0.196，帶入標準曲線y=0.7408x - 0.0289，計算x=（0.196+0.0289）/0.7408=0.304，按樣本質量計算酶活得：

AI活性（U/g質量）＝33.3×x÷W×稀釋倍數＝33.3×0.304÷0.1×2=202.46 U/g 質量。
參考文獻：

1. Huang Y W, Nie Y X, Wan Y Y, et al. Exogenous glucose regulates activities of antioxidant enzyme, soluble acid invertase and neutral invertase and alleviates dehydration stress of cucumber seedlings[J]. Scientia horticulturae, 2013, 162: 20-30.

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