結(jié)合態(tài)淀粉合成酶活性檢測試劑盒 微量法

結(jié)合態(tài)淀粉合成酶（GBSS）活性檢
測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC3295
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前取1瓶試劑二A加入8mL試劑一，緩慢加熱，逐漸升溫至煮沸使其溶解，冷卻后加入1支試劑二B和1支試劑二C混合溶解，這樣可以分兩批配制并且測定，用不完的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復(fù)凍融。

2. 試劑三：臨用前取1瓶試劑三B加入5mL試劑三A溶解備用，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融。

3. 試劑四：臨用前先離心，取12.5 μL試劑四加入4 mL溶解好的試劑三混合備用（約53T），現(xiàn)用現(xiàn)配，也可根據(jù)樣本量按比例配制。

4. 試劑五：臨用前取1瓶試劑五B加入8mL試劑五A和1支試劑五C溶解備用，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融。

5. 試劑六：臨用前取1支加入208 μL蒸餾水充分溶解，用不完的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復(fù)凍融。

6. 試劑七：臨用前加入2mL蒸餾水，用不完的試劑-20℃分裝保存8周，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品說明：
GBSS（EC 2.4.1.21）以束縛態(tài)存在于淀粉體中，催化淀粉鏈的加長反應(yīng)，主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成。
GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上，同時生成ADP；進(jìn)一步通過反應(yīng)體系中添加的 丙 酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP⁺還原為NADPH，其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比，通過340nm下測定NADPH的增加量，可以計算GBSS活性。

注意：實(shí)驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

實(shí)驗實(shí)例：

1. 取0.1g肝臟加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g，4℃離心10min，棄上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混勻，置冰上，之后按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測得計算ΔA=A2-A1=0.2685-0.2532=0.0153，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

GBSS活性（U/g 質(zhì)量）=43.2×ΔA÷W=6.6096 U/g 質(zhì)量。

1. 取0.1g柳樹加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g，4℃離心10min，棄上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混勻，置冰上，之后按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測得計算ΔA=A2-A1=2.2252-2.2184=0.0068，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

GBSS活性（U/g 質(zhì)量）=43.2×ΔA÷W=2.9376 U/g 質(zhì)量。
參考文獻(xiàn)：

1. Jiang H, Dian W, Wu P. Effect of high temperature on fine structure of amylopectin in rice endosperm by reducing the activity of the starch branching enzyme[J]. Phytochemistry, 2003, 63(1): 53-59.

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