土壤羥胺還原酶（HR）檢測試劑盒 微量法

土壤羥胺還原酶（S-HR）活性
檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC3015
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前取1瓶加入2.5mL蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑可以2-8℃保存一周；

2. 試劑三：臨用前沸水浴中加熱15min，開蓋10s后立即擰緊蓋子，待自然冷卻后再使用。使用過程中盡量不要敞口放置，取完立即加蓋擰緊。若長期敞口放置，可再次沸水浴10min（蓋蓋兒）冷卻至常溫使用；

3. 試劑四：臨用前加10mL蒸餾水溶解，此溶液為飽和溶液，取上清使用即可。用不完的試劑2-8℃保存2周；

4. 標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加1.028mL蒸餾水充分溶解，制備140μmol/mL鹽酸羥胺標(biāo)準(zhǔn)溶液待用，2-8℃保存2周。

產(chǎn)品說明：
土壤羥胺還原酶能將土壤中氮代謝過程中形成的中間產(chǎn)物羥胺還原為氨，土壤中的還原態(tài)化合物可作為氫的供體，其強(qiáng)弱影響到土壤氮代謝過程中氮素的氨揮發(fā)損失，間接影響氮肥的利用效率。

硫酸鐵銨中的Fe³⁺可將羥胺氧化為氮?dú)猓陨肀贿€原為Fe²⁺，F(xiàn)e²⁺在弱酸條件下與鄰菲羅啉形成橙紅色配合物，在510nm處有吸收峰，羥胺還原酶作用于羥胺，使配合物形成量減少，510nm處吸光值的減少可反映羥胺還原酶的活性。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、天平、水浴鍋、臺式離心機(jī)、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、30-50目篩、

漩渦震蕩儀、氮吹儀、研缽、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：

1. 土壤表層溶解氧濃度較大，取樣應(yīng)取表層5cm以下的土壤，否則酶活性較低或者測定不到。

2. 當(dāng)ΔA大于0.5時，建議將樣本上清液稀釋后再進(jìn)行測定。

3. 反應(yīng)體系最好能用氮吹儀排除溶解氧，若無此裝置，則加入試劑三后立即密封，于30℃反應(yīng)1h。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取2管0.02g三葉草土，按照測定步驟操作，用96孔板測得計(jì)算ΔA測定 =（A無基質(zhì)管-A空白管）-（A測定管-A對照管）=0.38-（0.326-0.116）=0.170，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0923x+0.0138，計(jì)算x=1.6923，按土壤質(zhì)量計(jì)算S-HR酶活得：

S-HR活性（U/g 土樣）=0.96x÷W = 81.23 U/g 土樣。

1. 取2管0.02g林土，按照測定步驟操作，用96孔板測得計(jì)算ΔA測定=（A無基質(zhì)管-A空白管）-（A測定管-A對照管）=0.38-（0.316-0.086）=0.150，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0923x+0.0138，計(jì)算x=1.4756，按土壤質(zhì)量計(jì)算S-HR酶活得：

S-HR活性（U/g 土樣）=0.96x÷W = 70.829 U/g 土樣。
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