土壤羥胺還原酶（HR）檢測試劑盒 微量法

土壤羥胺還原酶（S-HR）活性
檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC3015
規格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前取1瓶加入2.5mL蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑可以2-8℃保存一周；

2. 試劑三：臨用前沸水浴中加熱15min，開蓋10s后立即擰緊蓋子，待自然冷卻后再使用。使用過程中盡量不要敞口放置，取完立即加蓋擰緊。若長期敞口放置，可再次沸水浴10min（蓋蓋兒）冷卻至常溫使用；

3. 試劑四：臨用前加10mL蒸餾水溶解，此溶液為飽和溶液，取上清使用即可。用不完的試劑2-8℃保存2周；

4. 標準品：臨用前加1.028mL蒸餾水充分溶解，制備140μmol/mL鹽酸羥胺標準溶液待用，2-8℃保存2周。

產品說明：
土壤羥胺還原酶能將土壤中氮代謝過程中形成的中間產物羥胺還原為氨，土壤中的還原態化合物可作為氫的供體，其強弱影響到土壤氮代謝過程中氮素的氨揮發損失，間接影響氮肥的利用效率。

硫酸鐵銨中的Fe³⁺可將羥胺氧化為氮氣，自身被還原為Fe²⁺，Fe²⁺在弱酸條件下與鄰菲羅啉形成橙紅色配合物，在510nm處有吸收峰，羥胺還原酶作用于羥胺，使配合物形成量減少，510nm處吸光值的減少可反映羥胺還原酶的活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、天平、水浴鍋、臺式離心機、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、30-50目篩、

漩渦震蕩儀、氮吹儀、研缽、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：

1. 土壤表層溶解氧濃度較大，取樣應取表層5cm以下的土壤，否則酶活性較低或者測定不到。

2. 當ΔA大于0.5時，建議將樣本上清液稀釋后再進行測定。

3. 反應體系最好能用氮吹儀排除溶解氧，若無此裝置，則加入試劑三后立即密封，于30℃反應1h。

實驗實例：

1. 取2管0.02g三葉草土，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定 =（A無基質管-A空白管）-（A測定管-A對照管）=0.38-（0.326-0.116）=0.170，帶入標準曲線y=0.0923x+0.0138，計算x=1.6923，按土壤質量計算S-HR酶活得：

S-HR活性（U/g 土樣）=0.96x÷W = 81.23 U/g 土樣。

1. 取2管0.02g林土，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定=（A無基質管-A空白管）-（A測定管-A對照管）=0.38-（0.316-0.086）=0.150，帶入標準曲線y=0.0923x+0.0138，計算x=1.4756，按土壤質量計算S-HR酶活得：

S-HR活性（U/g 土樣）=0.96x÷W = 70.829 U/g 土樣。
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