植物蔗糖含量檢測試劑盒 微量法

植物蔗糖含量檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC2465
規格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
試劑一：臨用前加1mL蒸餾水溶解，用水稀釋10倍，備用，即1mg/mL。
產品說明：
蔗糖是植物光合作用的主要產物，也是糖分運輸和儲藏的主要形式。因此，測定蔗糖含量對于植物糖代謝具有重要意義。此外，蔗糖含量是飲料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等產品質量控制的重要指標之一。先用堿與樣本共熱，破壞其中的還原糖。然后在酸性條件下將蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，果糖進一步與間*二酚反應，生成有色物質，在480nm 下有特征吸收峰。
技術指標：
低檢出限：0.0316 mg/mL
線性范圍：0.039-12 mg/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
稱取0.1g 樣本，常溫研碎，加入0.5mL 提取液，適當研磨后快速轉移到離心管中，置于80℃水浴鍋中10min，振蕩3~5 次，冷卻后，4000g，25℃離心10min，取上清，加入2mg試劑五，80℃脫色30min，再加入0.5mL 提取液，4000g，25℃離心10min，取上清液測定。
二、測定步驟

1. 可見分光光度/酶標儀計預熱30min 以上，調節波長至480nm，蒸餾水調零。

2. 樣本測定（在1.5mL EP管中依次加入下列試劑）：

混勻，沸水浴10min左右，冷卻后取200μL至微量玻璃比色皿或96孔板中測定480nm 處的吸光值，空白管、標準管和測定管分別記為A1、A2 和A3。
三、蔗糖含量計算
1、按照樣本蛋白濃度計算
蔗糖含量（mg/mg prot）= (C標準管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr
此法需要自行測定蛋白濃度。
2、按照樣本質量計算
蔗糖含量(mg/g 質量）=(C標準管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷W
    C標準管：標準管濃度，1mg/mL；V1：加入樣本體積，0.025mL；V2：加入提取液體積，1mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。
注意事項：
當樣本吸光值大于1.4時，建議將樣本用提取液稀釋后進行測定。
參考文獻：
[1] Fils-Lycaon B, Julianus P, Chillet M, et al. Acid invertase as a serious candidate to control the balance sucrose versus (glucose+ fructose) of banana fruit during ripening[J]. Scientia horticulturae, 2011, 129(2): 197-206.
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