中性蛋*酶（NP）活性檢測試劑盒 微量法

中性蛋*酶（NP）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC2295
規格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前加入4mL蒸餾水，充分溶解。

2. 試劑二：臨用前加入4mL 提取液，沸水浴中攪拌溶解。

3. 標準品：20μmol/mL標準酪*酸。

產品說明：
 NP在一定的溫度和中性pH條件下，催化水解蛋白質。由于其安全無毒、水解能力強、作用范圍廣等特點，中性蛋*酶常用于食品、飼料、化妝品和營養保健品生產。中性條件下，NP催化酪蛋白水解產生酪*酸；在堿性條件下，酪*酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍；在680nm有特征吸收峰。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
研缽/勻漿器、臺式離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、1.5 mL EP管、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
稱約0.1g組織，加入1mL提取液，冰上充分研磨，10000rpm 4℃離心10min，取上清，即粗酶液，置冰上待測。或直接稱取0.1g酶制品，加入1mL提取液，置冰上待測。
二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長至680nm，蒸餾水調零。

2. 試劑一、試劑二和試劑三置于30℃水浴保溫30min以上。

3. 標準溶液的配制：臨用前將20μmol/mL標準液用蒸餾水稀釋80倍至0.25μmol/mL標準溶液使用，現用現配。

4. 樣本測定 (1.5mLEP管中分別加入下列試劑) ：

注意事項：
若反應較弱，（A測定管-A對照管）差值較小，可適當延長反應時間（20-30min），即第一步水浴時間，最后計算酶活時對公式進行修改。
實驗實例：

1. 取0.1g兔脾臟加入1mL提取液冰上充分研磨，10000rpm 4℃離心10min，取上清，即粗酶液，置冰上，之后照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.132-0.123=0.009，ΔA標準=A標準管-A空白管=0.259-0.045=0.214。按樣本質量計算酶活得：

NP活性（U/g 質量）=0.125×ΔA測定÷ΔA標準÷W=0.125×0.009÷0.214÷0.1=0.0526 U/g 質量。
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