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          • 胞漿異檸檬酸脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
          產(chǎn)品名稱:

          胞漿異檸檬酸脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

          產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
          廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2025-04-22
          儲(chǔ)存條件
          2-8℃
          中文名稱
          胞漿異檸檬酸脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
          有效期
          6個(gè)月
          單位

          推薦
          若使用96孔板測(cè)定,需使用96孔UV板,推薦貨號(hào)YA0602
          英文名稱
          Isocitrate Dehydrogenase Cytoplasmic(ICDHc) Activity Assay Kit
          檢測(cè)方法
          微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
          規(guī)

          產(chǎn)品概述

          品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
          分子式詳詢純度詳詢
          分子量詳詢貨號(hào)BC0405
          規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
          主要用途測(cè)定意義:ICDHc(EC 1.1.1.42)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


          胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)活性檢測(cè)試劑盒說明書
          微量法
          貨號(hào):BC0405
          規(guī)格:100T/96S
          產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

          試劑名稱規(guī)格保存條件
          提取液液體120 mL×1瓶2-8℃保存
          試劑一粉劑×12-8℃保存
          試劑二粉劑×12-8℃保存
          試劑三粉劑×12-8℃保存

          溶液的配制:

          1. 試劑一:用時(shí)加入20 mL提取液溶解;

          2. 試劑二:用時(shí)每支加275 μL雙蒸水充分溶解備用;

          3. 試劑三:用時(shí)每支加275 μL雙蒸水充分溶解備用;

          4. 工作液配制:將試劑一、試劑二、試劑三按85:11的比例混合,現(xiàn)用現(xiàn)配。

          產(chǎn)品說明:
          ICDHc(EC 1.1.1.42)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸,同時(shí)還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細(xì)胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源,在逆境中該酶活性通常會(huì)發(fā)生顯著變化。
          利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應(yīng),在340nm下測(cè)定NADPH濃度的增加,即可反映ICDHc活性。
          注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
          需自備的儀器和用品:
          紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
          操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
          注意事項(xiàng):

          1. 若A2-A1大于0.5,需將酶液用提取液稀釋,使A2-A1小于0.5,可提高檢測(cè)靈敏度。若初始值A1大于0.5可嘗試將酶液用提取液稀釋。

          2. 實(shí)驗(yàn)時(shí),試劑二、試劑三和樣本在冰上放置,以免變性和失活;工作液37℃水浴放置。

          3. 比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

          4. 最好兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn),一個(gè)人比色,一個(gè)人計(jì)時(shí),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

          實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

          1. 取0.1g稗草,加入1mL提取液,進(jìn)行冰浴勻漿,然后8000g 4℃離心10min,取上清,之后按照測(cè)定步驟操作,用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.2285-0.2139=0.0146,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

          ICDHc活性(U/g 質(zhì)量)=1608×ΔA÷W=234.768 U/g 質(zhì)量。

          1. 0.1g小鼠腎組織,加入1mL提取液,進(jìn)行冰浴勻漿,然后8000g 4℃離心10min,取上清稀釋10,之后按照測(cè)定步驟操作,用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.5989-0.1263=0.4726,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

          ICDHc活性(U/g 質(zhì)量)=1608×ΔA÷W×10=75994.08 U/g 質(zhì)量。
          參考文獻(xiàn):

          1. Miake F, TORIKATA T, KOGA K, et al. Isolation and characterization of NADP+-specific isocitrate dehydrogenase from the pupa of Bombyx mori[J]. The Journal of Biochemistry, 1977, 82(2): 449-454.

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           胞漿異檸檬酸脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法 胞漿異檸檬酸脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法


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