蔗糖合成酶(SS)活性檢測試劑盒 微量法

蔗糖合成酶（SS）
活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC0585
規格：100T/48S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
試劑二：臨用前加1 mL水，配制成10 mg/mL蔗糖溶液，再將其用蒸餾水稀釋為500μg/mL備用。
產品說明：
蔗糖是源（葉片等）光合產物向“庫"器官運輸的主要形態。SS（EC 2.4.1.13）催化植物體內游離果糖和葡萄糖合成蔗糖。
SS催化游離果糖與葡萄糖供體UDPG反應生成蔗糖，蔗糖與間*酚反應可呈現顏色變化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小與顏色的深淺成正比。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、離心機、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。   
二、測定步驟

1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至480nm，蒸餾水調零。

2. 樣本測定（在1.5mL EP管中依次加入下列試劑）：

混勻，80℃水浴保溫20min，冷卻后，12000rpm常溫離心10min。吸取200μL上清液于微量玻璃比色皿或者96孔板中，在480nm下測定各管吸光值（標準管和空白管只做1-2管，每個測定管需要設定一個對照管）。
計算ΔA測=A測定管-A對照管，ΔA標=A標準管-A空白管。
三、SS活力單位的計算

1. 按照蛋白濃度計算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產生1µg 蔗糖定義為一個酶活力單位。
SS活性(U/mg prot)=（C標準管×V1×ΔA測÷ΔA標）÷(V1×Cpr)÷T=50×ΔA測÷ΔA標÷Cpr

1. 按照樣本質量計算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產生1µg 蔗糖定義為一個酶活力單位。
SS活性(U/g 質量)=（C標準管×V1×ΔA測÷ΔA標）÷(W×V1÷V2)÷T=50×ΔA測÷ΔA標÷W
C標準管：標準管濃度，500µg/mL；V1：加入反應體系中樣本體積，0.01mL；V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；T：反應時間，10min。
注意事項：
盡量在30min內完成測定。
參考文獻：

1. Schrader S, Sauter J J. Seasonal changes of sucrose-phosphate synthase and sucrose synthase activities in poplar wood (Populus× canadensis Moench ‘robusta’) and their possible role in carbohydrate metabolism[J]. Journal of Plant Physiology, 2002, 159(8): 833-843.

2. Nomura T, Akazawa T. Enzymic mechanism of starch synthesis in ripening rice grains: VII. Purification and enzymic properties of sucrose synthetase[J]. Archives of biochemistry and biophysics, 1973, 156(2): 644-652.

3. Pressey R., Potato sucrose synthetase: purification, properties, and changes in activity associated with maturation[J]. Plant physiology, 1969, 44(5): 759-764.

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