Ca++Mg++——ATP酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
貨號(hào)：BC0965
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑三：臨用前取1支加入1 mL蒸餾水充分混勻待用；現(xiàn)用現(xiàn)配。用不完的試劑-20℃分裝保存一周。

2. 試劑六：臨用時(shí)加入5 mL蒸餾水，溶解后2-8℃保存兩周。

3. 試劑七：臨用時(shí)加入5 mL蒸餾水，溶解后2-8℃保存兩周。

4. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液。將標(biāo)準(zhǔn)品20倍稀釋?zhuān)慈?span style="font-family: Times New Roman, Times, serif">0.1 mL標(biāo)準(zhǔn)品加1.9 mL蒸餾水充分混勻，配成0.5 μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

5. 定磷劑的配制：按H₂O：試劑六：試劑七：試劑八=2:1:1:1（體積比）比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無(wú)色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑根據(jù)樣本量現(xiàn)用現(xiàn)配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
產(chǎn)品說(shuō)明：
Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶廣泛分布于植物、動(dòng)物、微生物和細(xì)胞中，可催化ATP水解生成ADP和無(wú)機(jī)磷。
根據(jù)Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶分解ATP生成ADP及無(wú)機(jī)磷，通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量來(lái)確定ATP酶活性高低。


注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：

   可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：

1. 由于每一個(gè)樣都必須做對(duì)照，本試劑盒100管只能測(cè)48份Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶。

2. 此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對(duì)測(cè)定所用試管要求嚴(yán)格無(wú)磷。避免磷污染是檢測(cè)成敗的關(guān)鍵。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g胰腺加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清置冰上，按照測(cè)定步驟操作，使用96孔板測(cè)得ΔA測(cè)定=0.535-0.238=0.297，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=0.280-0.043=0.237，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶活力(U/g 質(zhì)量) =7.5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=93.99 U/g 質(zhì)量。

1. 取0.1g柳樹(shù)加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清置冰上，按照測(cè)定步驟操作，使用96孔板測(cè)得ΔA測(cè)定=0.105-0.099=0.006，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=0.280-0.043=0.237，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：

Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶活力(U/g 質(zhì)量) =7.5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=1.90 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Yupu Jing,Hongli An,Shanjing Zhang,et al. Protein kinase C mediates juvenile hormone-dependent phosphorylation of Na⁺. Journal of Biological Chemistry. November 2018;(IF4.106)

參考文獻(xiàn)：

1. Datiles M J, Johnson E A, McCarty R E. Inhibition of the ATPase activity of the catalytic portion of ATP synthases by cationic amphiphiles[J]. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Bioenergetics, 2008, 1777(4): 362-368.

關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0060/BC0065 Na⁺k⁺-ATP酶活性檢試劑盒
BC0300/BC0305 ATP含量檢測(cè)試劑

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