Ca++Mg++——ATP酶活性檢測試劑盒 微量法

Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC0965
規格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑三：臨用前取1支加入1 mL蒸餾水充分混勻待用；現用現配。用不完的試劑-20℃分裝保存一周。

2. 試劑六：臨用時加入5 mL蒸餾水，溶解后2-8℃保存兩周。

3. 試劑七：臨用時加入5 mL蒸餾水，溶解后2-8℃保存兩周。

4. 標準品：10mmol/L 標準磷貯備液。將標準品20倍稀釋，即取0.1 mL標準品加1.9 mL蒸餾水充分混勻，配成0.5 μmol/mL標準磷應用液，現用現配。

5. 定磷劑的配制：按H₂O：試劑六：試劑七：試劑八=2:1:1:1（體積比）比例配制，配好的定磷劑應為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，定磷劑根據樣本量現用現配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
產品說明：
Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中，可催化ATP水解生成ADP和無機磷。
根據Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶分解ATP生成ADP及無機磷，通過測定無機磷的量來確定ATP酶活性高低。


注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：

   可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋/恒溫培養箱、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：

1. 由于每一個樣都必須做對照，本試劑盒100管只能測48份Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶。

2. 此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格無磷。避免磷污染是檢測成敗的關鍵。

實驗實例：

1. 取0.1g胰腺加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清置冰上，按照測定步驟操作，使用96孔板測得ΔA測定=0.535-0.238=0.297，ΔA標準=0.280-0.043=0.237，按樣本質量計算酶活得：

Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶活力(U/g 質量) =7.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W=93.99 U/g 質量。

1. 取0.1g柳樹加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清置冰上，按照測定步驟操作，使用96孔板測得ΔA測定=0.105-0.099=0.006，ΔA標準=0.280-0.043=0.237，按樣本質量計算酶活得：

Ca⁺⁺Mg⁺⁺-ATP酶活力(U/g 質量) =7.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W=1.90 U/g 質量。
相關發表文獻：

1. Yupu Jing,Hongli An,Shanjing Zhang,et al. Protein kinase C mediates juvenile hormone-dependent phosphorylation of Na⁺. Journal of Biological Chemistry. November 2018;(IF4.106)

參考文獻：

1. Datiles M J, Johnson E A, McCarty R E. Inhibition of the ATPase activity of the catalytic portion of ATP synthases by cationic amphiphiles[J]. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Bioenergetics, 2008, 1777(4): 362-368.

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