NADP磷酸酶活性檢測試劑盒 微量法

NADP磷酸酶（NADPase）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號: BC1115
規格: 100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：用時加入1.1 mL試劑一充分溶解備用，現配現用。

2. 試劑三：用時加入8 mL雙蒸水，溶解后2-8℃可保存一周。

3. 試劑四：用時加入8 mL雙蒸水，溶解后2-8℃可保存一周。

4. 標準品：10 mmol/L 標準磷貯備液。將標準品10倍稀釋，即取1 mL標準品加9 mL蒸餾水，充分混勻，配成1 μmol/mL標準磷應用液。

5. 定磷試劑的配制：按H₂O：試劑三：試劑四：試劑五=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷試劑應為淺黃色，若無色則試劑失效，若是藍色則為磷污染，定磷試劑根據實驗用量現用現配。

注意：配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
產品說明：
NADPase主要存在于植物組織中，是生物體內催化NADP⁺降解為NAD⁺的酶，與NADK一起調控NAD和NADP之間的平衡。
NADPase能夠催化NADP⁺水解為NAD⁺和無機磷的反應，通過測定無機磷的量來測定NADPase活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、勻漿器/研缽和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件

實驗實例：

1. 取0.1肝加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清之后按照測定步驟操作，使用96孔板測得計算ΔA測定=A測定-A對照=0.265-0.254=0.011，ΔA標準=A標準-A空白=0.533-0.047=0.486，按樣本質量計算酶活得：

NADPase (U/g質量) =0.25×ΔA測定÷ΔA標準÷W=0.25×0.011÷0.486÷0.1=0.057 U/g質量。

1. 取0.1g狗尾巴草（塊根)加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清之后按照測定步驟操作，使用96孔板測得計算ΔA測定=A測定-A對照=0.336-0.107=0.229，ΔA標準=A標準-A空白=0.533-0.047=0.486，按樣本質量計算酶活得：

NADPase (U/g質量) =0.25×ΔA測定÷ΔA標準÷W=0.25×0.229÷0.486÷0.1=1.18 U/g質量。
參考文獻：

1. Kawai S, Mori S, Mukai T, et al. Cytosolic NADP phosphatases I and II from Arthrobacter sp. strain KM: implication in regulation of NAD⁺/NADP⁺ balance[J]. Journal of Basic Microbiology: An International Journal on Biochemistry, Physiology, Genetics, Morphology, and Ecology of Microorganisms, 2004, 44(3): 185-196.

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