硫氧還蛋白還原酶活性檢測試劑盒 微量法

硫氧還蛋白還原酶（TrxR）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1155
規格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑三：臨用前取1支加入1.667 mL蒸餾水溶解，用不完的試劑-20℃保存2周。

2. 試劑四：體積量少，請離心后再使用。臨用前根據樣本數量將試劑四用無水乙醇稀釋10倍后使用。

產品說明：
    TrxR（EC，EC 1.8.1.9）是一種NADPH依賴的包含FAD結構域的二聚體硒酶，屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員，與硫氧還蛋白以及NADPH共同構成了硫氧還蛋白系統。TrxR與GR活性類似，催化*還原生成GSH，是谷*甘肽氧化還原循環關鍵酶之一。
TrxR催化NADPH還原DTNB生成TNB和NADP⁺，TNB在412nm有特征吸收峰，但還原型谷*甘肽與DTNB同樣能反應生成TNB，因此本試劑盒利用2-乙烯吡啶抑制樣本中原有的還原型谷*甘肽，通過測定412nm波長處TNB的增加速率，即可計算TrxR活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、可調節移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、蒸餾水、冰和無水乙醇。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：

1. 哺乳動物組織及血液制品TrxR活力測定時，一般須用蒸餾水稀釋5倍左右；測定過程操作須迅速。

2. 由于試劑一中含有一定濃度的蛋白（約0.1mg/mL），所以在測定樣本蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。

實驗實例：

1. 取0.1g月季花朵加入1mL 試劑一進行冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清置冰上，按照測定步驟操作，用微量玻璃比色皿測得計算ΔA =（A2測定-A1測定）-（A2空白-A1空白）=（0.8600-0.8177）-（0.0792-0.0727）=0.00358，按樣本質量計算酶活得：

TrxR活性（U/g 質量）=147×ΔA÷W=53.626 U/g 質量。

1. 取0.1g小鼠肝臟樣本加入1mL 試劑一進行冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清稀釋4倍置冰上，按照測定步驟操作，用微量玻璃比色皿測得計算ΔA =（A2測定-A1測定）-（A2空白-A1空白）=（0.8538-0.2101）-（0.0792-0.0727）=06371，按樣本質量計算酶活得：

TrxR（U/g 質量）=147×（ΔA測定管-ΔA空白管）÷W×4（稀釋倍數）=3746.148 U/g 質量。
相關發表文獻：

1. Li B, Li D, Jing W, et al. Biogenic selenium and its hepatoprotective activity[J]. Scientific reports, 2017, 7(1): 1-11.

2. Zhang L, Fan J, He J, et al. Regulation of ROS–NF‐κB axis by tuna backbone derived peptide ameliorates inflammation in necrotizing enterocolitis[J]. Journal of cellular physiology, 2019, 234(8): 14330-14338.

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