苯*氨酸解氨酶(PAL)活性檢測試劑盒 微量法

苯*氨酸解氨酶（PAL）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0215
規格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前取1瓶加入2.5 mL蒸餾水充分溶解待用；現配現用，2-8℃可保存2周。

產品說明：
PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數微生物中，是植物體內苯丙烷類代謝的關鍵酶和限速酶，在動物體內尚未發現。與一些重要的次生物質如木質素、類黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關，在植物正常生長發育、抗病、抗逆反應中起重要作用。
PAL催化L-苯*氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm處有最大吸收值，通過測定吸光值升高速率計算PAL活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟

1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至290nm，蒸餾水調零。

2. 操作表：（在EP管或96孔板中按順序加入下列試劑）

混勻，靜置10min后，290nm處記錄測定管吸光值A1和空白管吸光值A2，ΔA=A1-A2。（空白管只需做1-2次）
三、PAL活性計算
a、用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白在每mL反應體系中每分鐘使290nm下吸光值變化0.1定義為一個酶活性單位。
PAL活性（U/mg prot）=ΔA×V反總÷0.1÷（Cpr×V樣）÷T =13.33×ΔA÷Cpr
（2）按按樣本質量計算
單位的定義：每g組織在每mL反應體系中分鐘使290nm下吸光值變化0.1定義為一個酶活性單位。
PAL活性（U/g質量）=ΔA×V反總÷0.1÷（V樣÷V提取×W）÷T =13.33×ΔA÷W
V樣：加入樣本體積，5µL=0.005mL；V提取：加入提取液體積，1mL；V反總：反應總體積，200µL=0.2mL；T：反應時間，30min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。
b、用96孔板測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白在每mL反應體系中每分鐘使290nm下吸光值變化0.05定義為一個酶活性單位。
PAL活性（U/mg prot）=ΔA×V反總÷0.05÷（Cpr×V樣）÷T =26.67×ΔA÷Cpr
（2）按按樣本質量計算
單位的定義：每g組織在每mL反應體系中每分鐘使290nm下吸光值變化0.05定義為一個酶活性單位。
PAL活性（U/g質量）=ΔA×V反總÷0.05÷（V樣÷V提取×W）÷T =26.67×ΔA÷W
V樣：加入樣本體積，5µL=0.005mL；V提取：加入提取液體積，1mL；V反總：反應總體積，200µL=0.2mL；T：反應時間，30min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。
相關發表文獻：

1. Li B, Ding Y, Tang X, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus)[J]. Food and Bioprocess Technology, 2019, 12(4): 563-574.

2. Zhang J, Lv J, Xie J, et al. Nitrogen Source Affects the Composition of Metabolites in Pepper (Capsicum annuum L.) and Regulates the Synthesis of Capsaicinoids through the GOGAT–GS Pathway[J]. Foods, 2020, 9(2): 150.

參考文獻：

1. Ayda? S B, Ozturk S, Asl?m B. Phenylalanine ammonia lyase (PAL) enzyme activity and antioxidant properties of some cyanobacteria isolates[J]. Food chemistry, 2013, 136(1): 164-169.

2. Rosler J, Krekel F, Amrhein N, et al. Maize phenylalanine ammonia-lyase has tyrosine ammonia-lyase activity[J]. Plant physiology, 1997, 113(1): 175-179.

3. Cheng G W, Breen P J. Activity of phenylalanine ammonia-lyase (PAL) and concentrations of anthocyanins and phenolics in developing strawberry fruit[J]. Journal of the American Society for Horticultural Science, 1991, 116(5): 865-869.

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