考馬斯亮藍(lán)法測(cè)蛋白含量測(cè)定

考馬斯亮藍(lán)法測(cè)蛋白含量測(cè)定

貨號(hào)：YW2
規(guī)格：50T/48

產(chǎn)品簡(jiǎn)介 ：
    樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
    在酸性溶液中，考馬斯亮藍(lán) G-250 與蛋白質(zhì)結(jié)合形成藍(lán)色復(fù)合物；該復(fù)合物在 595nm 處有大吸收峰，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比。該方法靈敏度高，適合微量蛋白質(zhì)分析。

    聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N，N，N，N—四甲基乙二胺(簡(jiǎn)稱(chēng)TEMED)和催化劑過(guò)硫酸銨(簡(jiǎn)稱(chēng)AP)或核黃素(即vitamin B2)的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱(chēng)為聚丙烯酰胺凝膠電泳
(polyacrylamide gel electrophoresis，簡(jiǎn)稱(chēng)PAGE)

    SDS－PAGE是在要電泳的樣品中加入含有SDS和β-巰基乙醇(或者DTT)的樣品處理液，SDS可以斷開(kāi)分子內(nèi)和分子間的氫鍵，破壞蛋白質(zhì)分子的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)，β-巰基乙醇可以斷開(kāi)半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)。SDS還與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白質(zhì)－SDS復(fù)合物上帶有大量的負(fù)電荷，這時(shí)各種蛋白質(zhì)分子本身的電荷*被SDS掩蓋。這樣電泳時(shí)，就消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷及結(jié)構(gòu)上的差異，電泳速度只是與蛋白質(zhì)分子量有關(guān)。用本法測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量只需根據(jù)待測(cè)蛋白質(zhì)在已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)圖中的位置，就能得知分子量。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
     酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板、移液器和蒸餾水。

產(chǎn)品內(nèi)容 ：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 瓶，4℃保存。

操作步驟 ：
一 、 樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取 ：
    液體樣品：澄清無(wú)色液體樣品可以直接測(cè)定。
    組織樣品：準(zhǔn)確稱(chēng)取約 0.1 g 樣品，加 1mL 提取液（ 自備，根據(jù)需要可以是酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水） ，冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心 10min，取上清，即待測(cè)液。 （動(dòng)物樣品常常需要稀釋?zhuān)?br />二 、 吸光值測(cè)定 ：
    1. 分光光度計(jì)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 595nm，蒸餾水調(diào)零。
    2.  空白 管： 取 1mL 玻璃比色皿， 加入 200µL  蒸餾水， 1000µL 試劑一， 混勻后室溫靜置 10min， 于 595nm測(cè)定吸光度，10~20min 內(nèi)完成測(cè)定，記為 A 空白管。
    3.  標(biāo)準(zhǔn) 管： 取 1mL 玻璃比色皿， 加入 200µL  標(biāo)準(zhǔn)液， 1000µL 試劑一， 混勻后室溫靜置 10min， 于 595nm測(cè)定吸光度，10~20min 內(nèi)完成測(cè)定，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。
    4.  測(cè)定 管：取 1mL 玻璃比色皿板，加入 200µL  待測(cè)液，1000µL 試劑一，混勻后室溫靜置 10min，于595nm 測(cè)定吸光度，10~20min 內(nèi)完成測(cè)定，記為 A 測(cè)定管。
蛋白質(zhì)含量 計(jì) 算 ：
   C 待測(cè)（µg/m L）= C 標(biāo)準(zhǔn)管×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)=50×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)
   C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)品蛋白質(zhì)濃度，50µg/mL。

注意事項(xiàng) ：
    1．加考馬斯亮藍(lán)后，在 10~20min 內(nèi)吸光值相對(duì)較穩(wěn)定，因此須在 10~20min 完成比色。
    2．不宜用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，測(cè)完成后立即用 95%乙醇沖洗。
    3．測(cè)定前用 1~2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確保蛋白濃度在 0~100µg/ml 范圍內(nèi)，否則需要做相應(yīng)稀釋。

考馬斯亮藍(lán)法測(cè)蛋白含量測(cè)定訂購(gòu)說(shuō)明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運(yùn)輸說(shuō)明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶(hù)的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶(hù)的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。