AMV Reverse Transcriptase反轉錄酶Promega原裝

AMV Reverse Transcriptase反轉錄酶Promega原裝
貨號： M5101
規格：300u
保存: -20℃保存，避免反復凍融，保質期為2年。
產品內容：

產品簡介：
    逆轉錄酶（AMV）從Avian Myeloblastosis Virus分離出來，經過高度純化，不含核酸酶。可用于合成*鏈cDNA、制作cDNA探針、RNA轉錄、測序和RNA的逆轉錄反應。
    逆轉錄酶（AMV）一個活性單位U定義為：在37℃，10min條件下，使1nmol的脫氧核糖核酸摻入酸性沉淀物質所需的酶量。

使用說明：
    合成*鏈cDNA的步驟
    以下試劑客戶自己提供
    dNTPs (10mM)
    引物（Oligo dT（18）或隨機引物或特異性引物
    無核酸酶雙蒸水
    RNA模板
    RNase抑制劑
RT反應（20μl體系）：
    1．使用前每個組份輕輕混勻，然后2000rpm離心20s；
    2．取滅過菌且無核酸酶的0.2ml PCR管，依次加入
               2~5μg RNA Xμl
               引物* 1μl
              【引物*：Oligo dT18 (10μM)或隨機引物(50ng/μl) 或特異性引物(2μM)】
               dNTPs (10mM) 1μl
               補加無核酸酶的雙蒸水總體積 15.5μl
     3．65℃保溫5min，然后冰浴5min；
     4．往步驟3的PCR管中依次加入下列組份
               RNase抑制劑(40u/μl) 0.5μl
               10× AMV Reaction Buffer 2μl
               DTT ( 200mM) 1μl
               逆轉錄酶（AMV） 1μl
     5．輕輕混勻后，然后2000rpm離心20s；
     6．先在42℃保溫1 hr，然后70℃保溫15min；
     7．上述產物可立即進行下一步的PCR反應或-20℃保存。

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