線粒體提取試劑盒 亞細胞器

線粒體提取試劑盒 亞細胞器
貨號：SM0020
規格：50T/100T
保存：四周內使用可 4℃儲存，長期保存請置于-20℃

產品內容：

產品簡介：
    線粒體提取試劑盒用于從動物細胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于動物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養細胞的線粒體的制備。其制備物產量高，可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究。

操作步驟：
1. 樣本處理
   a. 組織勻漿：稱取 100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內。加入 1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨組織 20 次；
   b. 培養細胞勻漿：消化細胞，PBS洗滌，800g離心 5~10 min收集細胞，計數。每次提取需要 5×10 7 個細胞，加入 1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞，將細胞懸液轉移到小容量玻璃勻漿器內，0℃冰浴研磨 30~40 次。
2. 將組織或細胞勻漿物轉移到離心管，4℃，1000g 離心 5 min。
3. 取上清，轉移新的離心管中，4℃，1000g 再次離心 5 min。
4. 取上清，轉移新的離心管中，4℃， 12,000 g 離心 10 min。離心后的上清含胞漿成分，可從中提取胞漿蛋白。將上清轉移到新離心管，線粒體沉淀在管底。
5. 往線粒體沉淀中加入 0.5 mL Wash Buffer 重懸線粒體沉淀，4℃，1000 g 離心 5 min。
6. 取上清，轉移新的離心管中，4℃， 12,000 g 離心 10 min。棄上清，高純度的線粒體沉淀在管底。
7. 用 50 -100μL Store Buffer 或合適的反應緩沖液重懸線粒體沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事項：
    1. 為保證獲得完整的線粒體，務必做到：*，全程低溫操作；第二，快速；第三，在不破壞亞細胞器的情況下破碎細胞，這是制備線粒體的關鍵環節。與組織塊相比，培養細胞特別是貼壁培養細胞在用玻璃勻漿器勻漿時較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴密的研杵上下研磨培養細胞。
    2. 以離心力g計算正確的離心速度，不同的離心機可據此計算離心速度。
    3. 進行Western Blot和 2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解線粒體。
       轉速與離心力換算：
       G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
       G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數來表示；
       [rpm]２ 即：轉速的平方； R為半徑，單位為厘米。

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