Western blotting熒光檢測ECL超敏發光液

Western blotting熒光檢測ECL超敏發光液
貨號 ：PE0010 
規格 ：25ml/100ml
保存 ：4℃密封避光保存有效期一年以上。25℃室溫放置數月不影響質量。

產品簡介 ：
    ECL Plus 超敏發光液直接或間接檢測與辣根過氧化物酶 HRP 關聯的蛋白或核酸底物。這一*的發光底物系統是目前靈敏的商業化熒光 ECL 檢測試劑，具有靈敏度和高信噪比，可檢測出 10-100 fg 的微量抗原；發光迅速，熒光可使 X 感光膠片感光達 12 小時以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測。同時該試劑允許使用更高的抗體稀釋倍數（1：2000-1：10000），極其節省抗體。
用途：用于 HRP 標記抗體的 Western Blot 和 HRP 標記探針的核酸雜交。
安全性：無特殊毒性，按普通化學品處理。

    經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。Western blotting 檢測系統除需要過氧化物酶標記的各種二抗外，還需要配套的顯色試劑。索萊寶提供DAB顯色和ECL化學發光兩種試劑及相應試劑盒。

使用方法 ：
    1、常規電泳、轉膜、HRP 標記抗體或核酸探針孵育、洗膜。注意用 HRP 標記 IgG 或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP 夾心法。核酸雜交膜用 HRP 標記探針雜交，洗膜。
    2、在洗滌膜上的 HRP 標記二抗的同時，新鮮配制發光工作液：分別取等體積的溶液 A 和 B 混合，放置使之恢復室溫否則會減弱熒光強度。建議立即使用工作液，室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有減低。
    3、用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜*干燥。將膜*浸入并與發光工作液充分接觸（約0.125ml 發光工作液/cm 2 膜）。室溫孵育 3 分鐘后立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導致曝光條帶異常。發光過程的本質是酶促反應，使用過少的發光工作液不利于反應進行，也會導致膜上條帶曝光不均勻和靈敏度明顯降低。為達節約目的可將膜剪小但勿降低發光液用量。
    4、用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發光工作液。但勿洗去發光液。
    5、在 X 光膠片暗盒內面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將雜交膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來*包裹雜交膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發光工作液。用膠帶將覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內，好蛋白帶面向上。
    6、在黑暗中放入 X 感光膠片，分別曝光不同的時間如數秒到數分鐘。顯影沖洗。
 

注意事項 ：
    1、步驟 1-5 可在日光燈下操作；但發光液暴露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的潔凈。
    2、長時間曝光或蛋白質過量，將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關系。曝光不足則條帶模糊。
    3、 發光工作液孵育約 3 分鐘后膜上的條帶發光。 強條帶發光在暗房中肉眼可見， 低豐度蛋白條帶發光較弱，肉眼雖不可見但能使 X 膠片曝光。不能單憑肉眼觀察判斷條帶發光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續數小時并使 X 膠片感光，因而弱帶可曝光 1-10 小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 發光和曝光。
    4、 由于超敏發光液的高靈敏度， 強烈推薦大多數進口抗體起始濃度為一抗 1： 1000-1： 4000， 二抗 1： 2000-1：5000。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導致失敗！
    5、某些市售保鮮膜包裹印跡膜時會淬滅熒光，應選擇高質量保鮮膜，例如“克林萊”牌保鮮膜。
   6、 使用肉眼可見的預染色蛋白 Marker 和熒光-放射自顯影曝光標簽可幫助確定膠片上條帶的準確位置和大小。
   7、NaN3 能抑制 HRP 活性，回收二抗時應避免使用 NaN3，如必需使用勿超過 0.01%。 
 

相關產品 ：

P1020  1×PBS ， PH7.2-7.4 ， 0.01M
P1010  4× 蛋白上樣緩沖液（含 β- 巰基乙醇）
P1300  SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒
PR1700 預染次高分子量蛋白 MARKER
T1070  5×Tris- 甘氨酸電泳緩沖液
D1060  10× 電泳轉移緩沖液
SW3010 膜封閉液
SW3020 膜再生液

參考文獻：
《Glutamine Enhances the Hypoglycemic Effect of Insulin in L6 Cells via Phosphatidylinositol-3-Kinase (PI3K)/Protein Kinase B (AKT)/Glucose Transporter 4 (GLUT4) Signaling Pathway》 作者:Caijuan Wang, Yujiao Deng, Yenan Yue, Wenting Chen, Yu Zhang, Guifang Shi, and Zhongming Wu 期刊:Medical Science Monitor 影響因子:1.98 PMID:29491345
《Stem cells from human exfoliated deciduous teeth ameliorate type II diabetic mellitus in Goto-Kakizaki rats》 作者:Nanquan Rao, Xiaotong Wang, Yue Zhai, Jingzhi Li, Jing Xie, Yuming Zhao and Lihong Ge 期刊:Diabetology & Metabolic Syndrome 影響因子:2.361 PMID:30858895
《Laminar shear stress alters endothelial KCa2.3 expression in H9c2 cells partially via regulating the PI3K/Akt/p300 axis》 作者:Guojian Li, Qionghui Yang, Yong Yang, Guokai Yang, Jia Wan, Zhenhuan Ma, Lingjuan Du, Yi Sun, and Guimin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30664154
《IL‐37 inhibits invasion and metastasis in non‐small cell lung cancer by suppressing the IL‐6/STAT3 signaling pathway》 作者:Mingfang Jiang,  Ye Wang,  Hua Zhang,  Youxin Ji,  Peng Zhao,  Rongli Sun,  Chunling Zhang 期刊:Thoracic Cancer 影響因子:2.569 PMID:29575809
《Synergistic protection of matrine and lycopene against lipopolysaccharide?induced acute lung injury in mice》 作者:Wu?Wei Li， Tao?Yuan Wang ，Bo Cao， Bin Liu， Yu?Mei Rong ，Juan?Juan Wang ，Fei Wei ，Lu?Qing Wei， Hong Chen ，Yan?Xia Liu 期刊:Molecular Medicine Reports 影響因子:1.851 PMID:31180535
《C14orf159 suppresses gastric cancer cells’ invasion and proliferation by inactivating ERK signaling》 作者:Yan-Mei Zhu,Qiang Li, Xiao-Zhuo Gao, Xiao Meng, Li-Li Sun,Yu Shi,En-Tian Lu and Yong Zhang 期刊:Cancer Management and Research 影響因子:2.243 PMID:30863180
《Study of As2O3 regulating proliferation and apoptosis of Tca8113 cells by inhibiting the expression of Id-1》 作者:Yanfeng Zhu, Weihui Chen, Weiqun Guan, Yihong Fang & Chunfeng Hao 期刊:Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology 影響因子:4.462 PMID:31079498
《Sphingosine-1-Phosphate Improves the Biological Features of Mouse Bone Marrow-Derived EPCs Partially through PI3K/AKT/eNOS/NO Pathway》 作者:Xia Wang， Enxin Zhan ，Guohua Lu ， Qingjie Mu， Tianliang Zhang and Nana Yang 期刊:Molecules 影響因子:3.06 PMID:31261859

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