蛋白質電泳試劑Tris-Tricine-SDS-PAGE凝膠

蛋白質電泳試劑Tris-Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
貨號 ：P1320
規格 ：25 塊/50 塊/100 塊 PAGE 凝膠

產品內容 ：

    本產品所提供的 APS（過硫酸銨）為固體粉末，使用前加入雙蒸水溶解即配制成 10%APS 溶液（0.5g APS加 5ml 雙蒸水） ，將溶液分裝后置于-20℃保存，通常半年內有效。溶液在使用中可放置 4℃保存兩周。

產品簡介 ：
    常規的 Tris-SDS-PAGE 電泳的只能分辨大分子蛋白， 對于相對分子量小的， 尤其是 10 kD 以下的蛋白分辨率極低。而 Tricine-SDS-PAGE 可以很好的分離分子量在 1-10 kD 的蛋白及多肽，成為目前電泳法變性分離多肽的主要方法。本產品包括 Tricine-SDS- PAGE 凝膠制備所需全套試劑，只需自備蒸餾水，即可制備高質量各種濃度的凝膠，方便、快捷，電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。 

    聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N，N，N，N—四甲基乙二胺(簡稱TEMED)和催化劑過硫酸銨(簡稱AP)或核黃素(即vitamin B2)的作用下聚合交聯成三維網狀結構的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳
(polyacrylamide gel electrophoresis，簡稱PAGE)
    SDS－PAGE是在要電泳的樣品中加入含有SDS和β-巰基乙醇(或者DTT)的樣品處理液，SDS可以斷開分子內和分子間的氫鍵，破壞蛋白質分子的二級和三級結構，β-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質的四級結構。SDS還與蛋白質結合使蛋白質－SDS復合物上帶有大量的負電荷，這時各種蛋白質分子本身的電荷*被SDS掩蓋。這樣電泳時，就消除了各種蛋白質本身電荷及結構上的差異，電泳速度只是與蛋白質分子量有關。用本法測定蛋白質的分子量只需根據待測蛋白質在已知分子量的標準蛋白質圖中的位置，就能得知分子量。
 

注意事項 ：
    1、 10%APS 配制后分裝-20 度保存。 APS 溶液不穩定， 應盡量減少室溫存放時間， 每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若發現凝膠聚合時間延長，應考慮更換，使用-20 度保存的 10%APS。
    2、在凝膠配制過程中，尤其是液體混勻步驟，應盡量避免氣泡的產生。
    3、在分離膠上層加蒸餾水時要小心操作，加水時速度不能太快。
    4、丙烯酰胺具有神經毒性，操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。
    5、本產品僅用于科研，不能用于人體實驗或人體治療。
 

配膠說明 ：
    根據目的蛋白分子量大小選擇合適的 PAGE 分離膠配制濃度，凝膠濃度配方參考附表。

I 配制分離膠
    1、將不同體積的雙蒸水、49.5%T 6%C 、凝膠緩沖液和甘油加入到離心管中混合。
    2、加入 10%APS 和 TEMED，立即渦旋混勻 5-10 秒，以使溶液充分混勻。
    3、在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液（1 mm mini-gel，分離膠溶液加約 4 ml ） ，然后在分離膠溶液上輕輕 覆蓋一層 1-3 cm 的水層，使凝膠表面保持平整。
    4、靜置，待分離膠和水層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
II  配制夾層膠
    去除覆蓋在分離膠上的水層，用濾紙將殘留的水盡量吸去。
    1、將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C 和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。
    2、加入 10%過硫酸銨和 TEMED，立即渦旋混勻 5-10 秒，以使溶液充分混勻。
    3、將適量的夾層膠溶液迅速加分離膠的上面（對于 1 mm 的 mini-gel，夾層膠溶液加約 1 ml ） ， 然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層水層，使凝膠表面保持平整。
4、靜置，待夾層膠和水層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
III 配制濃縮膠
   去除覆蓋在夾層膠上的水層，用濾紙將殘留的水吸去。
   1、將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C 和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。
   2、加入 10%過硫酸銨和 TEMED，立即渦旋混勻 5-10 秒，以使溶液充分混勻。
   3、將梳子插入凝膠內，避免產生氣泡。
   4、待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。
   5、進行電泳操作。
IV 電泳
   將電泳槽放入 4℃或冰水浴中，外槽加入陽極緩沖液（T1225） ，內槽加入陰極緩沖液（T1215） ，30V 預電泳10min，將樣品（已經過 Tricine 上樣緩沖液 P1325 處理）加入點樣孔后 30V 電泳 1 小時，100V 電泳溴酚藍到達膠底部后停止電泳，進行后續的考馬斯亮藍染色或電轉。

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PR1300 超低分子量蛋白 MARKER
P1300-500  考馬斯亮藍快速染色液

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參考文獻：

《A deuterohemin peptide protects a transgenic Caenorhabditis elegans model of Alzheimer’s disease by inhibiting Aβ1–42 aggregation》 作者:Jia Xu，Ye Yuan，Ruining Zhang，Yanhui Song，Tianzhuo Sui，Jiaqi Wang，Chonghan Wang，Yujia Chen，Shuwen Guan，Liping Wang 期刊:Bioorganic Chemistry 影響因子:2.141 PMID:30428413