蛋白質(zhì)電泳試劑Tris-Tricine-SDS-PAGE凝膠

蛋白質(zhì)電泳試劑Tris-Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
貨號(hào) ：P1320
規(guī)格 ：25 塊/50 塊/100 塊 PAGE 凝膠

產(chǎn)品內(nèi)容 ：

    本產(chǎn)品所提供的 APS（過硫酸銨）為固體粉末，使用前加入雙蒸水溶解即配制成 10%APS 溶液（0.5g APS加 5ml 雙蒸水） ，將溶液分裝后置于-20℃保存，通常半年內(nèi)有效。溶液在使用中可放置 4℃保存兩周。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介 ：
    常規(guī)的 Tris-SDS-PAGE 電泳的只能分辨大分子蛋白， 對(duì)于相對(duì)分子量小的， 尤其是 10 kD 以下的蛋白分辨率極低。而 Tricine-SDS-PAGE 可以很好的分離分子量在 1-10 kD 的蛋白及多肽，成為目前電泳法變性分離多肽的主要方法。本產(chǎn)品包括 Tricine-SDS- PAGE 凝膠制備所需全套試劑，只需自備蒸餾水，即可制備高質(zhì)量各種濃度的凝膠，方便、快捷，電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實(shí)驗(yàn)。 

    聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N，N，N，N—四甲基乙二胺(簡(jiǎn)稱TEMED)和催化劑過硫酸銨(簡(jiǎn)稱AP)或核黃素(即vitamin B2)的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳
(polyacrylamide gel electrophoresis，簡(jiǎn)稱PAGE)
    SDS－PAGE是在要電泳的樣品中加入含有SDS和β-巰基乙醇(或者DTT)的樣品處理液，SDS可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵，破壞蛋白質(zhì)分子的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)，β-巰基乙醇可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)。SDS還與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白質(zhì)－SDS復(fù)合物上帶有大量的負(fù)電荷，這時(shí)各種蛋白質(zhì)分子本身的電荷*被SDS掩蓋。這樣電泳時(shí)，就消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷及結(jié)構(gòu)上的差異，電泳速度只是與蛋白質(zhì)分子量有關(guān)。用本法測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量只需根據(jù)待測(cè)蛋白質(zhì)在已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)圖中的位置，就能得知分子量。
 

注意事項(xiàng) ：
    1、 10%APS 配制后分裝-20 度保存。 APS 溶液不穩(wěn)定， 應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間， 每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長(zhǎng)，應(yīng)考慮更換，使用-20 度保存的 10%APS。
    2、在凝膠配制過程中，尤其是液體混勻步驟，應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。
    3、在分離膠上層加蒸餾水時(shí)要小心操作，加水時(shí)速度不能太快。
    4、丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性，操作時(shí)請(qǐng)穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。
    5、本產(chǎn)品僅用于科研，不能用于人體實(shí)驗(yàn)或人體治療。
 

配膠說明 ：
    根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的 PAGE 分離膠配制濃度，凝膠濃度配方參考附表。

I 配制分離膠
    1、將不同體積的雙蒸水、49.5%T 6%C 、凝膠緩沖液和甘油加入到離心管中混合。
    2、加入 10%APS 和 TEMED，立即渦旋混勻 5-10 秒，以使溶液充分混勻。
    3、在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液（1 mm mini-gel，分離膠溶液加約 4 ml ） ，然后在分離膠溶液上輕輕 覆蓋一層 1-3 cm 的水層，使凝膠表面保持平整。
    4、靜置，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。
II  配制夾層膠
    去除覆蓋在分離膠上的水層，用濾紙將殘留的水盡量吸去。
    1、將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C 和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。
    2、加入 10%過硫酸銨和 TEMED，立即渦旋混勻 5-10 秒，以使溶液充分混勻。
    3、將適量的夾層膠溶液迅速加分離膠的上面（對(duì)于 1 mm 的 mini-gel，夾層膠溶液加約 1 ml ） ， 然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層水層，使凝膠表面保持平整。
4、靜置，待夾層膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。
III 配制濃縮膠
   去除覆蓋在夾層膠上的水層，用濾紙將殘留的水吸去。
   1、將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C 和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。
   2、加入 10%過硫酸銨和 TEMED，立即渦旋混勻 5-10 秒，以使溶液充分混勻。
   3、將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
   4、待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。
   5、進(jìn)行電泳操作。
IV 電泳
   將電泳槽放入 4℃或冰水浴中，外槽加入陽(yáng)極緩沖液（T1225） ，內(nèi)槽加入陰極緩沖液（T1215） ，30V 預(yù)電泳10min，將樣品（已經(jīng)過 Tricine 上樣緩沖液 P1325 處理）加入點(diǎn)樣孔后 30V 電泳 1 小時(shí)，100V 電泳溴酚藍(lán)到達(dá)膠底部后停止電泳，進(jìn)行后續(xù)的考馬斯亮藍(lán)染色或電轉(zhuǎn)。

相關(guān)產(chǎn)品 ：

PC0020 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒
P1200 SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒
P1325  2 × Tris-Tricine-SDS-PAGE  上樣緩沖液 ( 含 DTT)
T1215  1 × Tris-tricine-SDS-PAGE 電泳緩沖液（陰極 - ）
T1225  1 × Tris-tricine-SDS-PAGE 電泳緩沖液（陽(yáng)極 + ）
PR1300 超低分子量蛋白 MARKER
P1300-500  考馬斯亮藍(lán)快速染色液

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參考文獻(xiàn)：

《A deuterohemin peptide protects a transgenic Caenorhabditis elegans model of Alzheimer’s disease by inhibiting Aβ1–42 aggregation》 作者:Jia Xu，Ye Yuan，Ruining Zhang，Yanhui Song，Tianzhuo Sui，Jiaqi Wang，Chonghan Wang，Yujia Chen，Shuwen Guan，Liping Wang 期刊:Bioorganic Chemistry 影響因子:2.141 PMID:30428413