支原體檢測(cè)試劑盒

支原體檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：CA1080
保存：4℃保存，有效期為 2 年，Hoechst 工作液需要避光保存。

產(chǎn)品內(nèi)容：
Hoechst 33258 工作液 50ml
固定液  50ml
抗熒光衰減封片液  10ml
說(shuō)明書(shū)  1 份

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
   本試劑盒是利用熒光染料（bisbenzimide,Hoechst 33258）檢測(cè)支原體污染。這種染料會(huì)結(jié)合到 DNA 的 A-T 富集區(qū)域，因?yàn)橹гw的 DNA 中 A-T 含量高（55％～80％），所以可將其染色而被檢測(cè)到。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后在細(xì)胞周?chē)煽吹皆S多大小均一的熒光小點(diǎn)，即為支原體的 DNA 染色斑，說(shuō)明有支原體污染。
   Hoechst 33258 的大激發(fā)波長(zhǎng)為 346nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為 460nm；Hoechst 33258 和雙鏈 DNA 結(jié)合后，大激發(fā)波長(zhǎng)為 352nm，大發(fā)射波長(zhǎng)為 461nm。

操作步驟：
貼壁細(xì)胞：
1、被檢細(xì)胞接種于無(wú)菌的 6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，接種密度為 1-2×10 4 。同時(shí)，接種正常無(wú)支原體感染的同種細(xì)胞，作為陰性對(duì)照。
2、5 天后，先吸去培養(yǎng)液，再加入 1ml 的固定液，靜置 20min，
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞），37℃避光放置 15-20min 或室溫靜置 20～30min。
5、吸去 Hoechst 33258 工作液，加入 2ml 滅菌超純水洗滌三次，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細(xì)胞周?chē)欠裼兴{(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。

懸浮細(xì)胞：
1、收集需檢測(cè)的細(xì)胞，1500rpm，5min。
2、將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上，再加 1ml 的固定液，靜置 20min。
3、吸去固定液，晾干。
4、于每孔中，加入 1ml 的 Hoechst33258 工作液（Hoechst 33258 工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞），37℃避光放置 15～20min 或室溫靜置 20～30min。
5、吸去 Hoechst 33258 工作液，用無(wú)菌水洗滌玻片 3 次，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封固液，并以蓋玻片覆蓋。
6、熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細(xì)胞周?chē)欠裼兴{(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀熒光小點(diǎn)。

結(jié)果判斷（參考）：
陰性：僅見(jiàn)細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)黃綠色熒光。
陽(yáng)性：除細(xì)胞外，細(xì)胞周?chē)梢?jiàn)大量的大小均一的熒光著色顆粒。

注意事項(xiàng)：
1．Hoechst 工作液對(duì)人體有害，請(qǐng)注意防護(hù)。
2．固定液有刺激性氣味，建議在通風(fēng)櫥進(jìn)行固定。
3．支原體檢測(cè)時(shí)，好用不含抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng) 2～3 代，這樣容易避免假陰性結(jié)果。
4．本試劑盒用于 6 孔板檢測(cè)時(shí)，可以進(jìn)行 50 次檢測(cè)反應(yīng)。
5． 檢測(cè)支原體污染， 可以使用支原體高效 Vero 細(xì)胞， 這樣可以提高檢測(cè)靈敏度， 即將被檢測(cè)樣品接種于 Vero細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。

相關(guān)產(chǎn)品：
P2100 10× 多聚賴氨酸
S2100 抗熒光衰減封片劑
C0020 Hoechst 33258 染色液（即用型）

支原體檢測(cè)試劑盒訂購(gòu)說(shuō)明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。

運(yùn)輸說(shuō)明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái)，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。