疏水層析填料DEAE Sephadex A－25 瓊脂糖凝膠

疏水層析填料DEAE Sephadex A－25 瓊脂糖凝膠
貨號 ：D8300
規格 ：25ml

簡介
   丁基-瓊脂糖凝膠 4B是將苯基鍵合在瓊脂糖凝膠4B上形成的一種可利用疏水相互作用來實現目標產品純化分離的疏水類介質。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。
   本品呈白色球狀凝膠，無嗅、無味、無肉眼可見雜質。
理化 特性

*柱子：內徑16mm、柱長10cm，柱床高5cm，25℃，流動相為0.1mol/LNaCl。

三 、  適用范圍
    丁基-瓊脂糖凝膠 4B是一種疏水層析介質，利用樣品中組分疏水性的不同進行分離。用于生物大分子的純化分離。

四 、 保存條件
    產品應密封貯存在 4℃~30℃（保存溶液為 20% 乙醇+0.1M 醋酸鈉） ，通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過的柱子貯存在 4℃（20% 乙醇） 。
保質期：5 年。

五 、 操作步驟 ：
1 、 裝柱
    （1）讓所有的材料和試劑達到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。
    （2）根據柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉 20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1 的比例）配成勻漿。
    （3）將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜） ，務必使底端無氣泡。
    （4）用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。
    （5）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過，使柱床穩定。用 2~3 倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2 、 平衡
     讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和 pH 不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如 0.02~0.05mol/L 的 PBS 加 1~2.5mol/L(NH4)2SO4 等。
3 、 上樣
    （1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。
    （2）一般情況是讓目標產品結合在柱子上，用平衡液洗去雜質，再選擇一種洗脫液洗下目標產物。
    （3）介質對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質、流動相的離子強度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強，介質對組分吸附牢。
4 、 洗脫
     疏水介質可用減小鹽濃度進行洗脫。加表面活性劑或有機溶劑可加強洗脫。常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如 0.02~0.05mol/L 的 PBS。
5 、 再生
    一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗 10 倍以上柱體積，接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
6 、 在位清洗
  （1）對于以離子鍵結合上去的蛋白，可以用 2M Nacl 去除。
  （2）對沉淀蛋白、對以疏水性結合的蛋白或脂類，可用 1M NaOH 去除。
  （3）對強疏水性結合的蛋白、脂類等，用 4~10 倍柱體積的 70%乙醇或 30%異丙醇清洗，但     要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產生氣泡。
    清洗完畢后，用少 3 倍緩沖液平衡柱子。
7 、 注意
    在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。
8 、 去熱源
    用 0.5M 的氫氧化鈉清洗柱子 5~6 小時或用 0.1M 的氫氧化鈉 24 小時。或用以下方法步驟去除：

（1）2 倍柱體積的 70%乙醇；
（2）2 倍柱體積 50mM Tris-HCl pH7.5；
（3）1 倍柱體積 4M 尿素；
（4）3 倍柱體積的 Tris 緩沖液+0.1M NaCl；
以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。

9 、  消毒
    用 0.5~1M NaOH 室溫下洗 8~10 倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。

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