β-淀粉*活性檢測試劑盒 微量法

β-淀粉*（
β-AL）活性檢測試劑盒說明書（DNS顯色法）
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2045
規格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：若有黃色晶體析出，需加熱溶解后再用；

2. 試劑二：臨用前取取1支試劑三加入到1瓶試劑二中，置于常溫水中并加熱至煮沸，期間不斷攪拌粉劑至溶解，用不完的試劑2-8℃保存4周；

3. 標準品：10 mg無水*萄糖。臨用前加入1 mL蒸餾水配制成10 mg/mL的標準溶液，2-8℃保存兩周。

產品說明：
淀粉*負責水解淀粉，主要包括α-淀粉*和β-淀粉*。β-淀粉*(EC 3.2.1.2) 從淀粉的非還原端切開α-1,4糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖。
還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質。α-淀粉*不耐酸，β-淀粉*不耐熱。根據上述特性，鈍化其中之一，就可測出另一種淀粉*的活力。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、離心機、可調式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研缽/勻漿器和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
稱取約0.1g樣本，加入0.8mL蒸餾水，研磨勻漿；將勻漿倒入離心管中，提取液在室溫下放置提取15min，每5min振蕩1次，使其充分提取；6000g，常溫離心10min，取上清液加蒸餾水定容至10mL，搖勻，即淀粉*原液。
吸取上述淀粉*原液1mL，加入4mL蒸餾水，搖勻，即為淀粉*稀釋液，用于（α+β）淀粉*總活力的測定。
二、測定步驟

1. 可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長到540nm，分光光度計蒸餾水調零。

1. 標準液的稀釋：將10mg/mL葡萄糖標準液用蒸餾水稀釋為0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078 mg/mL的標準溶液。

2. 標準液稀釋可參考下表：

備注：實驗中每個標準管需75µL標準溶液。

1. 取2支EP管分別加入75μL淀粉*原液和淀粉*稀釋液，沸水浴5min，分別作為α-淀粉*對照管和總淀粉*對照管使用。

2. 測定操作表：

混勻，沸水浴10min，取200μL至96孔板或微量玻璃比色皿中，在540nm下測定吸光度，從左到右分別記為A1、A2、A3、A4、A5和A6，計算ΔAα=A2-A1，ΔA總=A4-A3，ΔA標準=A5-A6。每個測定管需設一個對照管。標準曲線和空白管只需測1-2次。

注意事項：
測定的吸光值大于1.5時，可以對樣本進行適當稀釋后測定。若吸光值過小，可以濃縮淀粉*稀釋液或者淀粉*原液。
參考文獻：
[1] Dziedzoave N T, Graffham A J, Westby A, et al. Influence of variety and growth environment on β-amylase activity of flour from sweet potato (Ipomea batatas)[J]. Food control, 2010, 21(2): 162-165.
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