雙縮脲法蛋白含量測定試劑盒 微量法

雙縮脲法蛋白含量檢測試劑盒說明書
微量法
貨號: BC3185
規格: 100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
提取液：自備。根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水。
產品說明：
樣本可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。
強堿性溶液中，雙縮脲與CuSO₄形成紫色絡合物；紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關，故可用來測定蛋白質含量。該方法適用于蛋白質濃度高的樣本，尤其是動物材料。
技術指標：
低檢出限：0.1718 mg/mL
線性范圍：0.25-12 mg/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、離心機、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、液體樣本：澄清無色液體樣本可以直接測定。
2、組織樣本：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測液。（動物樣本常常需要稀釋）
3、細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長到540nm，蒸餾水調零。

2. 空白管：取0.5mL EP管，加入40μL蒸餾水，200μL試劑一，混勻后室溫靜置15min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，記為A空白管。

3. 標準管：取0.5mL EP管，加入40μL標準液，200μL試劑一，混勻后室溫靜置15min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，記為A標準管。

4. 測定管：取0.5mL EP管，加入40μL待測液，200μL試劑一，混勻后室溫靜置15min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，記為A測定管。

注意：空白管和標準管只需測定1-2次。

注意事項：

1. 樣本蛋白濃度須在0.25~12mg/mL范圍內，低于0.25mg/mL不能用此法，高于12mg/mL須做相應稀釋。因此測定前用1~2個樣做預實驗，確保蛋白濃度在0.25~12mg/mL范圍內。

2. 如果吸光值大于0.44，則需要將樣本用蒸餾水稀釋后再測定。

3. 待測樣本蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的PBS提取。該法受硫酸銨、Tris緩沖液干擾，提取液中應不含這些物質；否則改用BCA蛋白質含量測定試劑盒。

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