基因組提取試劑盒 質粒提取試劑盒

基因組提取試劑盒 質粒提取試劑盒
貨號：D6942
規格：100T

產品說明：
    質粒(Plasmid)是一種染色體外的穩定遺傳因子，大小從1-200kb不等，為雙鏈、閉環的DNA分子，并以超螺旋狀態存在于宿主細胞中。質粒主要存在于細菌、放線菌和真菌細胞中，它具有自主復制和轉錄能力，能在子代細胞中保持恒定的拷貝數，并表達所攜帶的遺傳信息。

質粒提取原理及流程：
    較常用的質粒DNA提取方法有3種：堿裂解法、煮沸法和去污劑(如Triton和SDS)裂解法。前兩種方法比較劇烈，適用于較小的質粒(<15kb)。去污劑裂解法則比較溫和，一般用于分離大質粒(>15kb)。堿裂解法是一種應用為廣泛的制備質粒DNA的方法，其原理為：染色體DNA比質粒DNA分子大得多，且染色體DNA為線狀分子，而質粒DNA為共價閉合環狀分子；當用堿處理DNA溶液時，線狀染色體DNA容易發生變性，共價閉環的質粒DNA在回到中性即恢復其天然構象；變性染色體DNA片段與變性蛋白質和細胞碎片結合形成沉淀，而復性的超螺旋質粒DNA分子則以溶解狀態存在液相中，離心去除沉淀后，就可從上清中回收質粒DNA。目前，市面上質粒提取試劑盒大多數都是采取上述的堿裂解方法，不同之處在于純化方式。目前比較常用的純化系統是硅基質吸附材料，其原理為在高鹽環境下質粒DNA能夠結合到硅基質上，然后用低鹽緩沖液或水將質粒DNA從硅基質上洗脫下來。得到的質?？梢杂糜诿盖?、PCR、測序、細菌轉化、轉染等分子生物學實驗。

質粒鑒定與評價：
瓊脂糖電泳檢測
    堿裂解法提取的質粒經瓊脂糖電泳進行鑒定時，理想狀況是只出現超螺旋—條帶，但在質粒提取過程中，由于機械力、酸堿度、試劑等原因，使質粒DNA鏈發生斷裂，可能出現兩條帶或者出現三條帶，這三條帶電泳遷移率從快到慢，分別是超螺旋、開環和復制中間體(即沒有復制*的兩個質粒粘連在—起)。如果加溶液Ⅱ后過度振蕩，會在遠離這三條帶的位置出現條帶，這條帶泳動得較慢，是大腸桿菌基因組DNA的片斷。非常偶然的是，有時候提取的質粒會出現4個以上的條帶，這是由于特殊的DNA序列導致了不同程度的超螺旋(超螺旋的圈數不同)所致。但是，只要質粒經單酶切鑒定后，只有單一條帶，就證明沒有基因組的污染。酶切檢測質粒提取后，為了進—步鑒定質粒的正確與否，就要進行酶切鑒定，通過與Marker對比，確定質粒的分子量大小。用紫外線分光光度計檢測濃度測定標準為：OD 260 值為1相當于大約50ug/ml雙鏈DNA。OD 260 /OD 280 比值1.7-1.9之間說明所得DNA純度較好。OD 260 /OD 280 比值若低于1.7說明可能有蛋白污染。OD 260 /OD 280 比值若高于2.0則說明DNA有可能已降解。如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為pH值和離子濃度會影響光吸收值，但并不表示純度低。

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2、低溫產品：低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
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