微生物培養基的滅菌方法

微生物培養基是供微生物生長和維持用的人工配制的養料，不同培養基可根據實際需要，添加一些自身無法合成的化合物，即生長因子。按照培養基的成分來分 培養基按其所含成分，可分為合成培養基、天然培養基和版合成培養基三類。按照微生物的種類分 培養基按微生物的種類可分為細菌培養基、放線菌培養基、酵母菌培養基和霉菌培養基等四類。培養基應具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。為了達到特定要求的研究，需要進行培養基配制和滅菌。那么微生物培養基的滅菌方法有哪些呢？

      微生物培養基的滅菌方法

      滅菌的方法，通常可以分為加熱滅菌（包括直接灼燒滅菌、干熱滅菌、加壓蒸汽滅菌、間歇滅菌和煮沸消毒）、過濾去菌、射線滅菌和消毒、化學藥劑滅菌和消毒四大類。下面具體講解微生物培養基的滅菌方法。

      1. 干熱滅菌法（即熱空氣滅菌法）

      干熱滅菌一般是利用電熱烘箱作為干熱滅菌器。前面所包裝好的玻璃器皿，如帶棉塞的三角瓶，試管、包裝好的吸管、培養皿等，放入電熱烘箱中。

      打開烘箱頂部的通氣孔，接上電源加熱，使箱內空氣的溫度達到160℃~170℃，關閉通氣孔使箱內的溫度保持在160℃左右并維持1.5-2h。時間一到，切斷電源。待溫度下降60℃~70℃以下，方可打開箱門取滅菌物品，否則驟冷后易使箱內玻璃儀器破損。

      2. 加壓蒸氣滅菌法

      利用高壓滅菌器，使水的沸點在密閉的滅菌器內隨壓力升高而增高，來提高蒸汽的溫度和滅菌的效率。

      在同一溫度下濕熱的殺菌效率比干熱大，因為微生物細胞蛋白質在濕熱情況下，易干凝固。同時濕熱的穿透力強，當水蒸汽與被滅菌的物品相接觸后，便放出汽化潛熱，逐步提高被滅菌物品的溫度，直與水蒸汽的溫度相等，達到平衡為止，從而提高滅菌效率。

      手提式高壓滅菌鍋滅菌的操作步驟如下：

      （1）在滅菌器內加入一定量的水（有的滅菌器內加水止水線）。將用防水紙包扎好的滅菌物品如培養基、無菌水等，放進滅菌器內。

      （2）接通電源，進行加熱。

      （3）當壓力到達5bl/in2時，打開放氣閥，使鍋內的空氣和水蒸汽一同排出，直壓力表的壓力恢復到零，然后關閉排氣閥，繼續加熱。

      （4）當壓力表＊的壓力到達15bl/in2（即 1.05kg/cm2）時，此時滅菌器內的溫度達到121℃，維持30min不變。對熱不穩定的培養基滅菌時，應適當降低壓力，延長時間。

      （5）滅菌時間一到，切斷電源，待壓力下降零時，才能打開排氣孔，然后打開滅菌器蓋，取出物品。如果滅菌后的固體培養基要做成斜面，需趁熱放置。還需檢查培養基滅菌是否*。

      3. 間歇滅菌法

      常采用阿諾（Arnold）氏滅菌器和柯赫（Koch）氏滅菌器或蒸籠滅菌，常壓條件下蒸汽溫度不超過100℃。在沒有高壓滅菌器設備的情況下或不宜加壓滅菌的物品，可采用此法滅菌。

方法是：待滅菌物品放在滅菌器或蒸籠里，每d蒸煮1次，每次煮沸lh，連續3d重復進行。在每兩次蒸煮之間，將物品（指培養基）放在37C恒溫條件下培養，這樣可以使每次蒸煮后未殺死的殘留芽孢萌發成營養體，以便下1次蒸煮時殺滅。

      4. 過濾除菌法

      一些不能加熱滅菌的液體物質（如維生素、血清），可以用過濾除菌法，一般用細菌過濾器進行除菌。

      細菌過濾器中的過濾板常用陶瓷、硅藻土或石棉等做成，過濾板孔眼很小，細菌不能通過。因此，過濾后的液體就除去了細菌。在進行過濾除菌前，整個細菌過濾器和接受液體的器皿，必須要包裝妥當并進行加壓蒸汽滅菌后方可使用。

      下面介紹石棉板濾器的構造及其操作方法。石棉板濾器又稱蔡氏（Scitz）濾器，它是由石棉制成的圓形濾板和一個特制漏斗組成。此漏斗分上下兩節。上節為圓形金屬筒，下節為金屬漏斗。兩節由三個活動螺旋固定，便于裝卸。使用時拆開兩節，將濾板放在漏斗上的金屬篩板，再加上上節，然后將螺旋扭緊，將欲濾溶液置于濾器中抽濾。每次過濾必須用一張無菌的新濾板。石棉板濾器因容積大小不同而有各種型號，石棉板也有不同規格型號使用時必須根據需要搭配妥當。

      5. 紫外線滅菌

      波長260~280nm之間的紫外線有很強的殺菌能力，一般紫外燈管能產生253.7nm的紫外光，殺死力強而穩定，但穿透力弱一般只適宜物體表面、空氣滅菌。例如接種室、培養室、手術室、藥廠包裝室等空氣滅菌。一般30w燈管、9m3空間，距地面2m每次打開紫外線照射0.5h，就使室內空氣滅菌。若照射紫外線時，先噴灑石碳酸等化學消毒劑，可增強滅菌效果。

      在進行微生物接種和分離等操作時，常須用紫外線來殺滅接種室（箱）空氣、臺面等處的微生物。

      紫外線雖有較強的殺菌力，但穿透力較弱，即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除，因此只適用于空氣及表面殺菌。

      紫外線對眼粘膜及視神經有強烈的損傷作用，對皮膚有刺激作用，所以不能直接在紫外線燈開啟下工作和用眼睛直視開啟的紫外燈。

      6. 化學藥劑消毒滅菌

      微生物實驗室中常用的化學殺菌劑有甲醛、高錳酸鉀、酒精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、新潔爾滅、煤酚皂溶液，它們有的是殺菌劑，有的是抑菌劑，

      以上就是說明，如果你的培養基中所有的成分都可以耐高溫，那就用壓力蒸汽高溫滅菌的方式。如果你的培養基中有些成分不耐高溫，就可以用除菌過濾的方式除菌：用除菌濾器過濾培養基已滅菌的培養器中。如何要求不高，部分試驗用培養基，可以用煮沸的方式滅菌。