MTT實驗原理

MTT是一種檢測細胞存活和生長的方法。MTT實驗原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。
在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。根據測得的吸光度值(OD值)，來判斷活細胞數量，OD值越大，細胞活性越強(如果是測藥物毒性，則表示藥物毒性越小)。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
MTT通常用于.細胞增殖及細胞活性測定以及藥物(也包括其他處理方式如放射線照射)對體外培養的細胞毒性的測定。
缺點：由于MTT經還原所產生的甲瓚產物不溶于水，需被溶解后才能檢測。這不僅使工作量增加，也會對實驗結果的準確性產生影響，而且溶解甲的有機溶劑對實驗者也有損害。
注意事項：
1、在配制和保存的過程中，容器好用鋁箔紙包住。
2、配成的MTT需要無菌，MTT對菌很敏感
3、MTT一般好現用現配，過濾后4度避光保存兩周內(個人曾做過4度避光保存4周的MTT溶液，效果仍然不錯)有效，或配制成5mg/ml保存在-20度長期保存，避免反復凍融，好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。當MTT變為灰綠色時就不能再用。
4、MTT有致癌性，用的時候小心,有條件好帶那種透明的簿膜手套.
通常，此法中的MTT濃度為5mg/ml。因此，可以稱取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸緩沖液（PBS）或無酚紅的培養基中，用0.22μm濾膜過濾以除去溶液里的細菌，放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的過程中，容器好用鋁箔紙包住