瓊脂糖凝膠電泳緩沖液配制

瓊脂糖凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，物質(zhì)分子通過時(shí)會(huì)受到阻力，大分子物質(zhì)在涌動(dòng)時(shí)受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質(zhì)和數(shù)量，而且還取決于分子大小，這就大大提高了分辨能力。在瓊脂糖凝膠電泳緩沖液又幾種適用于天然雙鏈DNA的電泳。

瓊脂糖凝膠電泳緩沖液配置

常見瓊脂糖凝膠電泳緩沖液配制（如圖）

TBE通常作為5×或10×的貯存液配制和貯存。這種濃的貯存液pH應(yīng)為8.3左右，它在應(yīng)用前稀釋，并用同一種貯存液制備凝膠溶液和瓊脂糖凝膠電泳緩沖液。

上述三種電泳緩沖液都比較好用，三者中TAE的緩沖容量低，長(zhǎng)時(shí)間電泳會(huì)被消耗。此時(shí)的凝膠的陽(yáng)性一側(cè)將發(fā)生酸性化，凝膠中向陽(yáng)極遷移的溴酚藍(lán)的顏色呈藍(lán)紫色到黃色的變化，所以需要定期更換緩沖液。

瓊脂糖凝膠電泳緩沖液配方注意事項(xiàng)

a.TBE濃儲(chǔ)存液長(zhǎng)時(shí)間存放后會(huì)形成沉淀物，為避免這一問題，可在室溫條件下用玻璃瓶保存5X溶液，出現(xiàn)沉淀后則予以廢棄。以往都以lX作為使用液(即1：5稀釋濃儲(chǔ)存液)進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。但0．5X的使用液已具備足夠的緩沖容量。目前幾乎所有的瓊脂糖凝膠電泳都以1：1

稀釋的儲(chǔ)存液作為使用液。進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳使用的lXTBE，是瓊脂糖凝膠電泳時(shí)使用液濃度的2倍。聚丙烯酰胺凝膠垂直槽的緩沖液槽較小，通過緩沖液的電流量通常較大，需要使用1XTBE以提供足夠的緩沖容量

b.堿性瓊脂糖凝膠電泳緩沖液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配

在配制瓊脂糖凝膠電泳緩沖液時(shí)，不論哪一種都需要加適量的EDTA，以除去2價(jià)金屬離子。另外，硼酸與瓊脂糖易形成復(fù)合物，使凝膠帶負(fù)電荷，可能會(huì)吸附帶正電荷的物質(zhì)。