CCK-8實驗注意事項及相關問題

Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8試劑盒，為MTT法的替代方法，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗。
活力計算：.
細胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[ A(0加藥)－A(空白)]×100
A（加藥）：具有細胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養基和CCK-8溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A（0 加藥）：具有細胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力
注意事項：
①建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑后的培養時間。
②白細胞可能需要培養較長時間。
③當使用標準96 孔板時，貼壁細胞的小接種量少為1 ,000個/孔 (100 μL培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 ( 100 μL培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的10% 加入CCK-8溶液。
④如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片，但是450nm檢測靈敏度高。

⑤培養基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。

常見問題：

1.一個孔中應接種多少個細胞？

當使用標準96孔板時，貼壁細胞的小接種量少為1,000 個/孔 (100 μl 培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μl 培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK-8溶液。

2.能否用384孔板進行試驗？

可以。向各孔中加入培養基體積10%的CCK-8溶液，如果加入的CCK-8體積太少，可以先將CCK-8溶液稀釋1倍，然后加入培養基體積20%的量。

3.能否用24孔板進行試驗？

可以。向各孔中加入培養基體積10%的CCK-8溶液。

4.酚紅會影響檢測嗎？

不會。培養基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。

5.CCK-8與胸苷結合檢測之間是否有相關性？

有。然而，請注意由于CCK-8使用的檢測原理與胸苷檢測的不同，因此結果可能不同。

6.CCK-8能否檢測細菌細胞？

可以檢測E.coli，但不能檢測酵母細胞。向100 μl E.coli培養液中加入10 μl CCK-8溶液，并培養1-4個小時。

7.CCK-8穩定嗎？

CCK-8在0-5℃下能夠保存少6個月，在-20℃下避光可以保存1年。如果需要長期保存，我們推薦-20℃的儲藏條件。

8.如果沒有450 nm的濾光片，還可以使用哪些其他濾光片？

還可使用450 nm到490 nm之間的濾光片。

9.如何減少由于CCK-8試劑在槍頭上或孔壁上的殘留所帶來的誤差？

可以在加樣前用培養基稀釋CCK-8試劑并混勻后加樣。

10.CCK-8是什么顏色？

應該是粉紅色。若顏色不一樣，有可能會影響測定。

CCK-8試劑盒應用非常廣泛，如藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。