木瓜蛋白酶活性測定

木瓜蛋白酶（Papain）是一種蛋白水解酶，又稱木瓜酶。是利用未成熟的番木瓜（Carica papaya）果實中的乳汁，采用現代生物工程技術提煉而成的生物酶制品。下面來詳細介紹一下木瓜蛋白酶活性測定的方法。

木瓜蛋白酶活性測定：（僅供參考）

木瓜蛋白酶活性測定原理

木瓜蛋白酶能使N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（底物）水解而釋出N-苯甲酰-L-精氨酸，其釋出量可用氫氧化鈉液滴定，以此確定酶活力。

酶活單位

在25℃下，每分鐘內能催化分解1umol底物的酶量，稱為1單位。

試液制備

1、底物溶液：準確稱取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯鹽酸鹽1.42g，加10mmol/LEDTA、50mmol/L半胱氨酸液2.6mL，加適量水，用0.1mol/L氫氧化鈉液調節pH6.2，后定容50.0mL。

2、待測酶液：取試樣用水稀釋適當濃度，并調節pH6.2。

方法

25℃恒溫條件下，取25mL燒杯裝在pH自動滴定儀上，加底物溶液3.75mL、3mol/L氯化鈉溶液2.50mL、重蒸餾水1.25mL，混合后加入待測酶液后立即計時，用0.1mol/L氫氧化鈉在電磁攪拌下連續滴定以保持pH6.2，記下每分鐘所耗0.01mol/L氫氧化鈉毫升數。同時進行空白校正。按下式計算木瓜蛋白酶的活力P（單位/mg）：

P =C·ΔV·1000/W

式中：c：氫氧化鈉液的濃度，mol/L；ΔV：每分鐘消耗氫氧化鈉液的體積減去空白值；W：反應液中木瓜蛋白酶的質量，mg。

木瓜蛋白酶科研應用

木瓜蛋白酶可用于細胞培養實驗，在準備細胞培養液（cellculture）的*步中被用于分離細胞。用酶處理小組織塊10分鐘后，就可以將連接細胞的細胞外基質打斷；然后再用蛋白酶抑制劑來停止反應，防止木瓜蛋白酶進一步裂解細胞本身；后用Pasteurpipette將組織塊打散為單細胞懸浮液。在免疫學中，木瓜蛋白酶可被用于將免疫球蛋白（即抗體）的Fc片段（可結晶）和Fab片段（抗原結合）切割開。

木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，屬于巰基蛋白酶，它具有酶活高、熱穩定性好、天然衛生安全等特點，因此在食品、醫藥、飼料、日化、皮革及紡織等行業得到廣泛應用。以上就是的方法，大家都學會了嗎？